[實用新型]一種實時熒光定量PCR儀

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201521132609.0
• 申請日: 2015-12-31
• 公開（公告）號: CN205329008U
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設計）人: 車團結;徐進章;常運朝;李琳;李亞鵬
• 申請（專利權）人: 蘇州百源基因技術有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M1/38;C12M1/34
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權代理有限公司 11250
• 代理人: 馬永芬

技術領域

本實用新型涉及生化設備領域，具體是一種實時熒光定量PCR儀。

背景技術

PCR(聚合酶鏈式反應)是指利用DNA在體外95℃的高溫時會變性成單鏈、低溫60℃左右時該單鏈會 與引物按堿基互補配對的原則結合、在調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應溫度72℃左右時DNA聚合酶會沿著磷 酸到五碳糖(5’-3’)的方向合成互補鏈的性質(zhì)，實現(xiàn)放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。而PCR 儀則是在變性溫度、復性溫度、延伸溫度之間實現(xiàn)很好的控制，使特定DNA的擴增得以實現(xiàn)的設備。為了 能夠?qū)崟r監(jiān)控反應過程，進而及時調(diào)整溫度，需要PCR儀在溫控的同時監(jiān)測靶基因。

傳統(tǒng)的PCR檢測方法是通過將擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳來判斷靶基因是否存在，但是該方法存在諸多不 足：由于PCR擴增的效率很高，靶基因從極少量擴增至大量并最終達到飽和的時間較短，電泳檢測只能得 到特定基因是否存在的定性結果，而無法區(qū)分上述過程，也無法對其數(shù)量或濃度定量檢測，同時，該方法 操作過程復雜，檢測時間長，無法滿足實時監(jiān)控反應過程的要求，另外，由于在操作過程中需要將檢測樣 本轉(zhuǎn)移，因此樣品容易受環(huán)境的污染，進而造成檢測結果不準確。

為了解決上述問題，出現(xiàn)了實時熒光定量PCR技術，例如，中國專利文獻CN101699271A公開了一種 實時熒光定量PCR激發(fā)檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)基于可調(diào)諧濾光片實現(xiàn)全波長熒光激發(fā)及檢測，該系統(tǒng)包括由光 源、聚光裝置和第一可調(diào)濾光片組成的熒光激發(fā)模塊；由第二可調(diào)濾光片、光檢測器和光電轉(zhuǎn)換裝置組成 的熒光檢測模塊；由波長調(diào)諧設備及主控計算機組成的控制單元；有反應試管、金屬溫塊及恒溫熱蓋組成 的熱循環(huán)系統(tǒng)。上述系統(tǒng)在DNA擴增反應中，通過熒光信號對PCR進行實時檢測，并經(jīng)數(shù)據(jù)處理對靶基因 進行定量分析，操作簡單，能夠自動、快速的完成對靶基因的定量檢測，并且在檢測過程中不受環(huán)境污染， 檢測結果較為準確。但是，上述實時熒光定量PCR激發(fā)檢測系統(tǒng)以及目前其他的實時熒光定量PCR儀均在 溫度控制方面還存在缺陷：一方面，在反應的某一階段，保持在某一特定的溫度狀態(tài)時，需要PCR儀具有 良好的溫度均一性；另一方面，在實時監(jiān)控反應過程中，需要在適當時機及時調(diào)整溫度，這進一步要求PCR 儀可以迅速調(diào)整溫度，并在較短的時間內(nèi)達到溫度的均一性；上述實時熒光定量PCR激發(fā)檢測系統(tǒng)以及目 前其他的實時熒光定量PCR儀的溫度均一性最優(yōu)僅能達到±0.1℃，即雖然能夠?qū)崟r檢測反應過程，卻不 能很好的實現(xiàn)溫度控制，而對于PCR來說，反應是一個動態(tài)競爭的過程，反應溫度和時間決定了哪個產(chǎn)物 能夠勝出，因此，上述缺陷導致了其不能實現(xiàn)檢測樣品多位點突變、單核苷酸多態(tài)性-SNP、基因分型等多 種分析功能。

實用新型內(nèi)容