[發(fā)明專利]預(yù)測腫瘤對TRAIL類似物敏感性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611147049.5
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106591449B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賴兵;姬建新;翟祎星;鐘應(yīng)佳;黃迎春;楊莉;邢曄;陳嬌
• 申請（專利權(quán)）人: 成都地奧九泓制藥廠
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51230
• 代理人: 楊保剛;晏輝

1.檢測基因表達水平的試劑在制備預(yù)測腫瘤對DATR敏感性的產(chǎn)品中的用途，其特征在于：基因包括DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2，腫瘤細胞株來源于肺，結(jié)直腸，胸或肝，檢測步驟如下：

(1)以上述的腫瘤細胞株作為樣本庫，通過實時熒光定量PCR測定樣本庫中腫瘤細胞株的DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2六種基因的mRNA表達水平，以Cq值表示；

(2)在體外實驗中測定樣本庫中腫瘤細胞株在濃度為0.0002-12μg/mL的DATR處理下的生存率，生存率＝實驗組細胞活力/對照組細胞活力，指示其對DATR的敏感性；

(3)以腫瘤細胞株中六種基因的Cq值為自變量，以DATR處理下各腫瘤細胞株的生存率為因變量，通過多元線性回歸建模，篩選并建立最優(yōu)的多元線性方程，公式為：

V＝a*Cq(DR4)+b*Cq(DR5)+c*Cq(DcR2)+d*Cq(CASP8)+e*Cq(c-FLIP)+f*Cq(HTATIP2)+g，其中，V指生存率；Cq(X)指qPCR中目的基因X的絕對定量熒光閾值循環(huán)數(shù)，或相對于GAPDH的相對定量熒光閾值循環(huán)數(shù)；a-f為系數(shù)，g為常數(shù)，均可為0；

(4)提取患者腫瘤細胞株或循環(huán)腫瘤細胞或腫瘤組織，檢測上述基因的mRNA表達水平，即Cq值，代入多元線性方程，通過計算預(yù)測該病人對DATR的敏感性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測基因表達水平的試劑在制備預(yù)測腫瘤對DATR敏感性的產(chǎn)品中的用途，其特征在于，步驟(1)的方法為：

(a)提取腫瘤細胞株的總RNA，以此為模版反轉(zhuǎn)錄構(gòu)建cDNA文庫；

(b)利用實時熒光定量PCR檢測DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2六種基因的mRNA表達水平，以Cq值表示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測基因表達水平的試劑在制備預(yù)測腫瘤對DATR敏感性的產(chǎn)品中的用途，其特征在于，步驟(b)中，

DR4基因的上游引物為5’-AATCAGGCAATGGACATAA-3’，下游引物為5’-GCAACAACAGACAATCAG-3’，

DR5基因的上游引物為5’-TCAGGCATCATCATAGGA-3’，下游引物為5’-TCAGGTAAGGAAGGACTT-3’，

DcR2基因的上游引物為5’-TTGCCTTCTTGCCTGCTA-3’，下游引物為5’-GTCTCTGGTCGTGGTACA-3’，

CASP8基因的上游引物為5’-AAGAGAATGTTGGAGGAA-3’，下游引物為5’-TTAGGTAGGTAATCAGCAA-3’，

c-FLIP基因的上游引物為5’-GATACAGATGAGAAGGAGATG-3’，下游引物為5’-CCTGACATTAGGTGGAAC-3’，

HTATIP2基因的上游引物為5’-GTGAATCAAGAAGTGGTG-3’，下游引物為5’-CAACAGAATCCAACATCAT-3’。