[實(shí)用新型]用于檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201520364068.8
• 申請(qǐng)日: 2015-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN204649750U
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉麗媛;秦曉明;吳純斌;王顯鳳;王緒華;梁超;陳忠;方國(guó)偉;黃士昂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京海思特臨床檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 北京天奇智新知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340
• 代理人: 陸軍

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑盒。

背景技術(shù)

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory?cell,簡(jiǎn)稱Treg)是在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞，它既能抑制不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)，又能限定免疫應(yīng)答的范圍、程度及作用時(shí)間，對(duì)效應(yīng)細(xì)胞的增殖、免疫活性的發(fā)揮起抑制作用。到目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種表型的Treg存在，其中CD4+Treg的研究最為廣泛。CD4+CD25+Treg不僅具有免疫抑制的功能，而且抑制作用可過(guò)繼轉(zhuǎn)移。同時(shí)，去除CD4+CD25+Treg還能激發(fā)有效的腫瘤免疫反應(yīng)。

天然CD4+CD25+Treg在正常人外周血中占總CD4+T細(xì)胞的5％～10％，它構(gòu)成性表達(dá)CD25、CD122、CTLA-4、GITR、CD103、CD62L等。但是，這些分子同樣在活化的CD4+效應(yīng)T細(xì)胞也有表達(dá)，所以它們都不是天然CD4+CD25+Treg的特異性標(biāo)志。人CD4+CD25+T細(xì)胞上的CD25表達(dá)數(shù)量和熒光強(qiáng)度呈連續(xù)性表達(dá)狀態(tài)，這種連續(xù)性表達(dá)使得采用CD4/CD25分子確定Treg細(xì)胞比例很困難。

研究者們常常采用CD25磁珠和流式細(xì)胞術(shù)體外分選的方法來(lái)純化CD4+CD25+Treg，但不同研究組報(bào)道的Treg所占比例差異很大。原因在于盡管采用限制性分離CD25高表達(dá)的細(xì)胞群，仍不能除外含有活化的CD4+CD25+效應(yīng)T細(xì)胞，而且限制性分離CD25高表達(dá)的細(xì)胞群易導(dǎo)致Treg的丟失，因此需要更特異的表面標(biāo)記和更好的檢測(cè)手段來(lái)分選Treg。

有研究者用CD4+CD25int/highCD127low來(lái)標(biāo)記Treg，但是通過(guò)抗體的熒光強(qiáng)度的不同來(lái)標(biāo)記細(xì)胞群容易受到儀器狀態(tài)、個(gè)人主觀印象的影響，不夠客觀，并且特異性不強(qiáng)。

實(shí)用新型內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型的目的在于提供一種用于檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑盒，可以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在外周血中的比例，大大提高檢測(cè)的特異性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取的技術(shù)方案是：一種用于檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑盒，包括盒體(1)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(1)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD3的試劑管(4)、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD4的試劑管(5)、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD25的試劑管(6)、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體FoxP3的試劑管(7)、裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管(8)、裝有PBS緩沖液的試劑管(9)、裝有打孔固定液的試劑管(10)和裝有破膜緩沖液的試劑管(11)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。

其中，上述單克隆抗體使用不同的熒光標(biāo)記；優(yōu)選地，CD3單克隆抗體使用Percp標(biāo)記，CD4單克隆抗體使用FITC標(biāo)記，CD25單克隆抗體使用APC標(biāo)記，F(xiàn)oxP3單克隆抗體使用PE標(biāo)記。

其中，所述紅細(xì)胞裂解液、PBS緩沖液、打孔固定液和破膜緩沖液均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑。

其中，所述襯墊(3)上設(shè)有8個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成兩排平行排列。

通過(guò)以上技術(shù)方案，本實(shí)用新型的有益效果如下：

(1)本實(shí)用新型的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，方便攜帶、保存，不易受污染；

(2)由于FoxP3特異性地表達(dá)在CD4+CD25+Treg中，本申請(qǐng)的技術(shù)方案將FoxP3作為T(mén)reg的一個(gè)特異標(biāo)志，使用CD4+CD25+FoxP3+標(biāo)記Treg細(xì)胞，檢測(cè)的特異性更強(qiáng)；

(2)本實(shí)用新型的試劑盒在使用時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求不高，只要有流式細(xì)胞儀的實(shí)驗(yàn)室即可開(kāi)展檢測(cè)，便于技術(shù)廣泛推廣，檢測(cè)操作時(shí)間短、檢測(cè)精度高，上機(jī)操作和數(shù)據(jù)分析方法簡(jiǎn)單，可以在第一時(shí)間得到臨床所需資料。

附圖說(shuō)明

圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為采用本實(shí)用新型的試劑盒檢測(cè)某患者的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的結(jié)果示意圖。

圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD3的試劑管，5-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD4的試劑管，6-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD25的試劑管，7-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體FoxP3的試劑管，8-裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管，9-裝有PBS緩沖液的試劑管，10-裝有打孔固定液的試劑管，11-裝有破膜緩沖液的試劑管。

具體實(shí)施方式