[實用新型]一種脫氧雪腐鐮刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A復合免疫親和柱

有效

• 申請號: 201520249909.0
• 申請日: 2015-04-23
• 公開（公告）號: CN204514929U
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 張波;王松雪;謝剛
• 申請（專利權）人: 北京康源泰博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于分析檢測技術領域，具體涉及一種脫氧雪腐鐮刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A復合免疫親和柱。

背景技術

真菌毒素是由真菌生長產生的有毒次生代謝產物，在糧食或飼料生產過程中，由于溫度、濕度等因素的影響，為真菌的生長繁殖提供適宜條件，從而引起真菌毒素的污染。據世界糧農組織報告，全球每年約有25%的農作物遭受真菌及其毒素污染，約有2%的農作物因污染嚴重而失去營養和經濟價值。真菌毒素對人類和動物健康可產生嚴重的影響，許多國家在近幾十年來制定了諸多有關食品和飼料中真菌毒素的法規，以保護人類和動物的健康，并保障生產者和貿易商的經濟利益。到2003年末，大約有100個國家已經為食品和飼料中的真菌毒素制定了各種特定的限量標準，而且該數目還在繼續增加之中。脫氧雪腐鐮刀烯醇、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素是糧食飼料中常見的真菌毒素，在被真菌污染的谷物中，經常可以同時檢測出。

脫氧雪腐鐮刀烯醇（嘔吐毒素，DON）和玉米赤霉烯酮同屬鐮刀霉毒素，主要是由鐮刀菌屬真菌產生，常見于小麥，玉米等谷物中。可對人、畜產生廣泛的毒性效應，如食欲降低、體重減輕、代謝紊亂等。脫氧雪腐鐮刀烯醇污染谷物的狀況非常普遍，是檢出率和檢出量最高的真菌毒素之一，人畜攝入了被脫氧雪腐鐮刀烯醇污染的食物后，會導致厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩和反應遲鈍等急性中毒癥狀，嚴重時損害造血系統造成死亡，但不同的動物對脫氧雪腐鐮刀烯醇的敏感程度不一，豬最敏感。另外脫氧雪腐鐮刀烯醇對免疫系統有影響，有明顯胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。玉米赤霉烯酮是一種酚的二羥基苯酸的內酯結構，主要由禾谷鐮刀菌產生，粉紅鐮刀菌、竄珠鐮刀菌、三線鐮刀菌等多種鐮刀菌也能產生，首先由赤霉病玉米中分離得出。玉米赤霉烯酮具有雌激素樣作用，具有較強的生殖毒性和致畸作用，可引起動物發生雌激素亢進癥，導致動物流產、死胎、返情等生殖異常現象，對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業帶來很大的經濟損失。2003年止，據世界糧農組織公布已有19個國家制定了食物中玉米赤霉烯酮的限量標準。赭曲霉毒素A在真菌毒素中分布最廣。赭曲霉毒素A已被國際癌癥研究機構確定為ⅡB類致癌物的一種霉菌毒素，它能致癌、致畸、致突變、破壞免疫系統，對肝、腎臟造成損害，還可導致神經中毒。

目前，真菌毒素的檢測方法主要有薄層色譜法，免疫分析法及精密儀器分析法。其中，免疫分析方法主要有酶聯免疫法和膠體金免疫層析法，可以對樣品中的真菌毒素進行快速的定量、定性檢測；精密儀器分析法主要有高效液相色譜法、超高效液相色譜法和液質聯用法，可以對樣品中的真菌毒素進行精確定性、定量分析，是真菌毒素檢測的確認方法。但是，由于需要檢測樣品種類繁多，影響因素各種各樣，要想使這些檢測方法能夠達到理想的檢測效果，則需要將樣品進行不同程度的前處理。

免疫親和柱是利用抗原抗體反應的高特異性和高親和力，用適當的方法將特異性的抗體結合到固相載體上，以便有效的分離、純化目標物質，具有選擇性高、富集能力強等優點，用于真菌毒素檢測的樣本前處理，可以更好的消除影響因素，減小基質效應，減少假陽性和假陰性的出現。

實用新型內容

本實用新型的目的在于提供一種脫氧雪腐鐮刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A復合免疫親和柱，用于樣品中脫氧雪腐鐮刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A檢測的樣品前處理方法。

本實用新型所述的免疫親和柱由柱管、瓊脂糖凝膠、篩板、上下帽組成；瓊脂糖凝膠上偶聯了抗脫氧雪腐鐮刀烯醇單克隆抗體和抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體，由上下各一塊篩板固定在柱管底部；柱管的兩端分別蓋有上帽和下帽。其所用瓊脂糖凝膠為CNBr-Sepharose?4B，每根親和柱含量為0.3ml-0.5ml；每根親和柱所含抗脫氧雪腐鐮刀烯醇單克隆抗體、抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體和抗赭曲霉毒素A單克隆抗體分別為0.8?mg?-2.5mg、0.5?mg?-2mg和0.4?mg?-1mg；柱管為3ml或1ml的柱管。

本實用新型所述的免疫親和柱的制備方法，按照下述步驟進行：

（1）抗體預處理：將純化好的抗脫氧雪腐鐮刀烯醇單克隆抗體、抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體和抗赭曲霉毒素A單克隆抗體置于pH8.3含有0.5M?NaCl的0.1M?NaHCO3緩沖液中透析12h；

（2）凝膠活化：稱取適量的CNBr-Sepharose?4B干粉，用1mM鹽酸浸泡使其充分溶脹后，在砂心漏斗中用pH8.3含有0.5M?NaCl的0.1M?NaHCO3緩沖液快速抽洗3次；