[發明專利]pfHRP-2重組蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201511034789.3
• 申請日: 2015-12-31
• 公開（公告）號: CN105541983B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 康可人;袁江海;吳培鈿;才蕾;矯麗媛;王繼華
• 申請（專利權）人: 廣州萬孚生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K14/445
• 分類號: C07K14/445;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 曾鳳云;萬志香

本發明公開了一種pfHRP?2重組蛋白及其應用，所述pfHRP?2重組蛋白具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，其可用于瘧疾pfHRP?2檢測的陽性質控品。本發明所述的pfHRP?2重組蛋白在分子結構上具有高穩定性，作為陽性質控品使用時，將質控品復溶到原體積，即可使用，可在2～40℃保存1年以上，滿足運輸及使用過程中對高溫環境的要求；復溶后，可在2～30℃保存1個月以上，以確保重復使用。

技術領域

本發明屬于生物制品技術領域，特別是涉及一種pfHRP-2重組蛋白及其在瘧疾pfHRP-2檢測試劑盒的陽性質控品中的應用。

背景技術

瘧疾是一種由按蚊傳播的寄生蟲病，以發熱、寒戰、貧血為特征。瘧原蟲可分為四種(惡性瘧、間日瘧、卵形瘧和三日瘧)。目前全球90多個國家報道了瘧疾病例，據估計全球每年發現5億多臨床病例和270多萬瘧疾所致死亡病例，其中惡性瘧所致死亡病例最多。

檢測瘧疾的方法主要分三種：病理學診斷、免疫學診斷和分子生物學診斷。其中病理學診斷(顯微鏡鏡檢)是目前公認的金標準，缺點是需要訓練有素的檢驗技術員，敏感性較低，不是所有的實驗室都能開展瘧原蟲鏡檢工作；分子生物學診斷靈敏度高于病理學診斷，但其缺點是技術復雜，設備和環境要求高、費時，不能在現場應用。

免疫學診斷通過檢測高特異性的靶抗原來實現，目前公認的瘧疾靶抗原主要有富組氨酸蛋白-2(Plasmodium falciparum Histidine-rich protein 2,pfHRP2)、瘧原蟲乳酸脫氫酶(Plasmodium Lactate Dehydrogenase,pLDH)。依照標記和檢測系統的不同可分為:間接熒光抗體法(Indirect Fluorescent Antibody Test IF-AT)、酶聯免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbentassay,ELISA)、免疫層析技術等。其中基于免疫層析技術的膠體金試劑從取血、反應至結果判斷，只需10～15min，而且多個樣本可同時進行檢測，不需特殊儀器，非常適合于瘧疾高發的邊遠山區基層醫院、衛生所防保醫生和村醫應用。

體外診斷試劑校準品(物)、質控品(物)是實現體外診斷試劑臨床檢測及監督檢驗結果準確一致的主要工具，也是保證量值傳遞的實物計量標準，如何確保檢測試劑的有效性引起了FDA的關注，在2015年FDA公告中要求將質控品作為瘧疾HRP 2膠體金檢測試劑的必備組分之一。但就目前而言，在市面上很難購買到膠體金產品的質控品。

常規表達的pfHRP 2重組蛋白需在高堿性的緩沖情況下才可以充分溶解，而高堿的環境并不適合蛋白的活性保持，特別是在蛋白濃度低的情況下，另外高堿性的緩沖環境，并不適合膠體金檢測。

瘧疾流行區主要位于熱帶和亞熱帶地區，例如非洲、東南亞等。這些區域氣候炎熱，地理位置偏僻，經濟落后。美國CTK生物技術公司的質控品采用凍干保存的形式，干粉2～30℃可保存1年，重溶后2～8℃可保存1周，其要求存儲溫度低于30℃，重溶后需低溫保存，不適合高溫環境，且重溶后穩定性差，只能保存一周時間。BinaxNOW公司的質控品采用凍干保存的形式，干粉2～8℃保存，重溶后≤-20℃保存，同樣不適合高溫環境。因此，開發一種能夠適合高溫環境的瘧疾HRP-2膠體金檢測的質控品顯得尤為重要。

發明內容

基于此，為了克服上述現有技術的缺陷，本發明提供了一種pfHRP-2重組蛋白及其在瘧疾pfHRP-2檢測的陽性質控品中的應用，該陽性質控品適合高溫環境，具有高穩定性，用于檢定試劑卡的有效性。

為了實現上述發明目的，本發明采取了以下技術方案：

一種pfHRP-2重組蛋白，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

本發明還提供了所述pfHRP-2重組蛋白在瘧疾pfHRP-2檢測中作為陽性質控品的應用。