[發明專利]一種多價EZH2腫瘤相關抗原肽及其制備

在審

• 申請號: 201511027007.3
• 申請日: 2015-12-31
• 公開（公告）號: CN105602915A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 王艷林;楊文;馬小猛;李倩;楊建林
• 申請（專利權）人: 三峽大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/40;C07K16/06;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

技術領域

本發明涉及免疫學領域。具體而言，本發明涉及多價EZH2腫瘤相關抗原肽。本發明 還涉及編碼所述抗原肽的分離的核酸，包含所述核酸的構建體和載體，以及包含所述核酸 的宿主細胞。本發明還涉及所述抗原肽的制備方法和其在制備藥物組合物或疫苗中的用 途。

背景技術

EZH2是多梳蛋白家族的重要成員，它與其它3個亞基(EED、SUZ12和RbAp46/48)一 道共同組成多梳蛋白抑制性復合體2(polycombrepressivecomplex2,PRC2)。作為PRC2 的核心亞基，EZH2具有組蛋白甲基轉移酶活性，在維持細胞增殖、干細胞自我更新和調節細 胞周期中發揮重要作用，并通過與組蛋白去乙酰化酶(HDACs)和DNA甲基轉移酶(DNMTs)協 同作用使抑癌基因表達沉默，由此促進腫瘤發生以及侵襲轉移。人EZH2基因由20個外顯子 和19個內含子構成，編碼由746個氨基酸殘基構成的蛋白分子(MargueronR等人，Nature, 469(7330):343-349(2011)；VireE等人，Nature,439(7078):871–874(2006))。近年來研究 發現，EZH2是一種腫瘤相關抗原，能作為腫瘤標志物在不同的腫瘤組織中高表達，且其表達 水平與腫瘤的惡性程度高度正相關，由此EZH2正在成為抗腫瘤免疫治療的新靶點 (BenetatosL等人，CellMolLifeSci,71(2):257-269(2014)；ChangCJ等人，BrJ Cancer,106(2):243-247(2012)；CreaF等人，CritRevOncolHematol,83(2):184-193 (2012)；WanL等人，ClinTranslOncol,15(2):132-138(2013)；GoeBP等人，PlosOne,8 (8):e71670(2013)；Hajosi-KalcakoszS等人，Diagnpathol,7:86(2012))。已經在EZH2蛋 白一級結構中鑒定出多個可作為腫瘤相關抗原的肽段，包括Aa120-128，Aa165-174，Aa243- 245，Aa291-299，Aa666-674，Aa699-708，Aa735-742等。重要的是這些腫瘤相關抗原肽在體 內能誘導產生抗腫瘤抗體并激活特異性T淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷活性，提示EZH2在抗 腫瘤免疫治療中的重要應用價值(OgataR等人，Prostate,60(4):273-281(2004)；Steele JC等人，BriJCancer,95(9):1202–1211(2006)；KomoharaY等人，JUrol,177(3):1157- 1162(2007)；ItohY等人，OncolRep,18(5):1231-1237(2007))。

由于短肽(如氨基酸序列長度在30aa以下)的原核表達通常存在表達量低，純化困 難，免疫原性差等問題，為了獲得高純度EZH2腫瘤相關抗原肽，本發明選取4條已經鑒定的 EZH2腫瘤相關抗原肽(Aa120-128，Aa165-174，Aa291-299，Aa735-742)，利用基因重組技術 在原核表達系統中人工設計與合成了含有上述4種EZH2腫瘤抗原肽的小分子融合蛋白(稱 之為多價EZH2腫瘤相關抗原肽)，其保留了EZH2的抗原特征，能在動物體內誘導特異性抗體 生成。

發明內容

在本發明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術 人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的細胞培養、分子遺傳學、核酸化學、生物化學、 免疫學實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的常規步驟。同時，為了更好地理解本發 明，下面提供相關術語的定義和解釋。

根據本發明，術語“免疫原性(immunogenicity)”是指，能夠刺激機體形成特異抗 體或致敏淋巴細胞的能力。其既指，抗原能刺激特定的免疫細胞，使免疫細胞活化、增殖、分 化，最終產生免疫效應物質如抗體和致敏淋巴細胞的特性，也指抗原刺激機體后，機體免疫 系統能形成抗體或致敏T淋巴細胞的特異性免疫應答。免疫原性是抗原最重要的性質，一種 抗原能否成功地誘導宿主產生免疫應答取決于三方面的因素：抗原的性質、宿主的反應性 和免疫方式。

根據本發明，術語“免疫原性片段”是指這樣的多肽片段，其至少部分地保留了所 源自的蛋白的免疫原性。