[發明專利]一種FAP納米抗體Nb57

有效

• 申請號: 201511024916.1
• 申請日: 2015-12-30
• 公開（公告）號: CN106928368B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 盧小玲;趙永祥
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;G01N33/574;G01N33/573;A61K39/395;A61P35/00;B01J20/24;B01D15/08;B82Y30/00
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 郭偉剛;周嬌嬌

本發明公開了針對于FAP多肽分子抗原表位的一種FAP納米抗體，同時還公布了編碼該FAP納米抗體的基因序列以及能夠表達該FAP納米抗體的表達載體和宿主細胞，并且公開了該FAP納米抗體的用途。通過本發明公開的FAP納米抗體、基因序列及宿主細胞等，可以在大腸桿菌內高效表達出FAP納米抗體，其與FAP免疫反應特異性好、親和力高，可應用于制備FAP檢測試劑或抗腫瘤藥物等。

技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，更具體地說，涉及一種針對于FAP多肽分子抗原表位分子的納米抗體(Nb57)、其編碼序列及用途。

背景技術

成纖維細胞激活蛋白(fibroblast activation protein，FAP)是腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的一種表面抗原，具有二肽基肽酶和膠原酶活性，它基因組穩定，具有促進腫瘤細胞生長，侵襲及免疫抑制的作用。FAP由761個氨基酸組成，在不同哺乳動物細胞中的糖基化水平不同，單體相對分子質量有8.8×10⁴、9.5×10⁴、9.7×10⁴等多種報道，二聚體相對分子質量為1.7×10⁵。FAP的結構分為胞漿區、跨膜區和胞外區三部分，其中胞漿區是由開頭6個氨基酸組成的短肽鏈，跨膜區是由19個氨基酸組成，起到固定作用的疏水跨膜片段，然而FAP分子中氨基酸序列20～761的絕大部分都暴露在細胞外的微環境中，這一部分就是胞外區，是關鍵的酶催化區。FAP同時具有二肽基肽酶活性和膠原酶活性，能夠降解基質中的二肽和Ⅰ型膠原。FAP與屬于二肽基肽酶家族的DPPIV(dipeptidyl peptidase IV/CD26)具有50％的同源性，均具有肽鏈外切酶活性，常形成復合物。因此，推測FAP可通過調節腫瘤基質中某些肽類生長因子，修飾活性肽并改變其功能，從而促進腫瘤的發生發展。

在惡性腫瘤中，FAP陽性的成纖維細胞僅占腫瘤細胞總數的2％，但當其被去除后，癌細胞及基質細胞都會發生迅速的壞死。由此可以看出，FAP對惡性腫瘤的發生和發展具有非常重要的作用，而在腫瘤治療方面則具有廣闊的應用前景。靶向腫瘤微環境，尤其是靶向FAP的治療策略在腫瘤治療中扮演著非常重要的角色。在腫瘤發生、發展過程中，腫瘤細胞不僅被動地逃避免疫系統的攻擊，同時也主動地抑制其生長環境中的免疫細胞的正常功能，它與其所處的微環境相互作用，形成抑制性腫瘤微環境并促進腫瘤的惡性進展，這些因素的存在為探討腫瘤發生機制及開辟新的腫瘤免疫治療方案提供了思路。

目前已經發展了幾種FAP特異性單克隆抗體，并開始在臨床診斷和治療中得到應用，其對腫瘤組織的親和力得到了提高。但是這種傳統方法存在抗體穩定性差、靈敏度低、生產成本高等缺點。

納米抗體技術，是生物醫學科學家在傳統抗體的基礎上，運用分子生物學技術結合納米粒子科學的概念進行的抗體工程革命，從而研發出的最新和最小的抗體分子，最初由比利時科學家萊曼德.哈馬斯在駱駝血液中發現。普通的抗體蛋白由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，而從駱駝血液中發現的新型抗體只有兩條重鏈，沒有輕鏈，這些“重鏈抗體”能像正常抗體一樣與抗原等靶標緊緊結合，但不像單鏈抗體那樣相互黏連聚集成塊。以該“重鏈抗體”為基礎的納米抗體不僅分子量只是普通抗體的1/10，而且化學性質也更加靈活，穩定性好，可溶性高，表達容易且容易獲得，并容易偶聯其他分子。但是，現有技術中并沒有針對FAP研發出適用的納米抗體。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于，針對現有技術中缺乏針對FAP表位的納米抗體的缺陷，提供一種FAP納米抗體，同時提供編碼該FAP納米抗體的DNA分子以及該納米抗體的用途等。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：本發明的第一方面，提供了一種FAP納米抗體，該FAP納米抗體為針對FAP表位的納米抗體，包括兩條如SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的VHH鏈。本發明中該FAP納米抗體可以簡稱為Nb57。