[發明專利]一種篩選用于促進植物吸收重金屬的根系共生菌的方法

在審

• 申請號: 201511016726.5
• 申請日: 2015-12-29
• 公開（公告）號: CN105462838A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 任瑞霞;李楠
• 申請（專利權）人: 中林山水（北京）生態科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.篩選用于促進植物吸收重金屬的根系共生菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)獲取樣品：以在重金屬污染嚴重的土壤中生長良好的植物樣品的完整根系以及根系周圍的土壤為樣品；

(2)菌體富集：將采集的樣品剪碎后加入富集瓶中，所述富集瓶盛裝有含有固相吸附載體、重金屬化合物和制霉菌素的液體培養基，所述固相吸附載體用于吸附根系所帶的細菌；

(3)菌種初篩：搖床培養所述富集瓶，將經搖床培養后的富集瓶中的固相吸附載體取出，置于含有重金屬化合物的無菌固體培養基上，長出單菌落后，分離單菌落，單獨培養獲得單菌落菌液；

(4)菌種復篩：將所述單菌落菌液和重金屬化合物加入到水培植物的根部培養液中共培養，檢測水培植物體內的重金屬含量，比對照的重金屬含量高的處理所對應加入的單菌落菌液即為促進重金屬土壤植物修復的根系共生菌。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相吸附載體選用活性炭、稻殼、珍珠巖或玉米秸稈中的一種或多種，使用比例參照：150ml的三角瓶中投入5-20g。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述重金屬化合物選自氯化鋅、硫酸鋅、氯化銅中的一種或多種，其在所述液體培養基、所述固體培養基以及水培植物的根部培養液中的濃度為樣品采集地污染土壤中重金屬濃度的8～12倍。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，每100ml所述液體培養基中添加4～6mg所述制霉菌素。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述搖床培養條件為：溫度30℃，轉速150～180r/min，培養30～60天；所述將經搖床培養后的富集瓶中的固相吸附載體取出指培養過程中每5天將富集瓶中50％的固相吸附載體轉移到新的所述富集瓶中培養，取出經富集培養的最后一個富集瓶中的固相吸附載體。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌種復篩步驟中的共培養條件：30℃，60r/min搖床培養30～60天。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述水培植物為綠蘿或彩葉草。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括在菌體富集之前對采集的樣品采用無菌水進行初步沖洗。

9.根據權利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，

所述液體培養基的配方為：蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000ml，pH為7.2±0.2；

所述固體培養基的配方為：蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml，pH為7.2±0.2。