[發(fā)明專利]一種研究微生物間相互關(guān)系的透析袋分離培養(yǎng)法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201511013560.1
• 申請(qǐng)日: 2015-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN105483043A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳廷濤;辛洪波;孟凡景;王鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12Q1/06
• 代理公司: 南昌市平凡知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 36122
• 代理人: 夏材祥

1.一種研究不同種類微生物共同培養(yǎng)的方法，其特征是:

（1）pH值檢測(cè)

a量取去離子無菌水約50ml，加入濃鹽酸，用pH調(diào)節(jié)計(jì)配制pH=4的溶液；

b取200ml去離子無菌水放入燒杯A1，同時(shí)加入5ml上述pH=4的溶液，用PH計(jì)檢測(cè)燒 杯A1內(nèi)pH；依次取5ml上述pH=4的溶液分別加入到5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋內(nèi)并用透 析袋夾將其兩頭密封，將透析袋分別置于200ml去離子無菌水的燒杯B1、C1、D1、E1內(nèi)，用pH 計(jì)檢測(cè)上述四只燒杯內(nèi)pH值，記錄B1、C1、D1、E1燒杯內(nèi)PH值達(dá)到A1燒杯pH的時(shí)間，記為時(shí)間 T₁；

（2）葡萄糖檢測(cè)

a用去離子無菌水配制濃度為25%的葡萄糖溶液50ml

b取200ml去離子無菌水加入燒杯A2，同時(shí)加入5ml上述濃度為25%的葡萄糖溶液，用葡 萄糖試劑盒檢測(cè)并記錄燒杯內(nèi)葡萄糖濃度；依次取5ml上述濃度為25%的葡萄糖溶液分別加 入5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋內(nèi)，將透析袋分別放入盛有200ml去離子無菌水的燒杯B2、 C2、D2、E2內(nèi)，用葡萄糖試劑盒檢測(cè)燒杯B2、C2、D2、E2內(nèi)葡萄糖濃度，記錄B2、C2、D2、E2燒杯 內(nèi)葡萄糖濃度達(dá)到A2燒杯葡萄糖濃度一致的時(shí)間，記為時(shí)間T₂；

（3）BSA牛血清蛋白檢測(cè)

a用無菌PBS配制濃度為2%的牛血清蛋白溶液50ml

b取200mlPBS加入燒杯A3，同時(shí)加入5ml上述濃度為2%的牛血清蛋白溶液，檢測(cè)并記 錄燒杯A3內(nèi)牛血清蛋白溶液濃度；取5ml上述濃度為2%的牛血清蛋白溶液分別加入5kd、 10kd、25kd、1000kd透析袋內(nèi)，將透析袋分別放入盛有200ml無菌PBS的燒杯B3、C3、D3、E3內(nèi)， 檢測(cè)燒杯B3、C3、D3、E3內(nèi)牛血清蛋白濃度，記錄B3、C3、D3、E3燒杯內(nèi)牛血清蛋白濃度達(dá)到A3 燒杯牛血清蛋白濃度一致的時(shí)間，記為時(shí)間T₃；

（4）通過對(duì)時(shí)間T₁、T₂、T₃的統(tǒng)計(jì)，確定細(xì)菌共培養(yǎng)最佳培養(yǎng)時(shí)間為T₄，最佳透析袋孔徑 為1000kd；

(5)根據(jù)步驟（4）結(jié)果，將不同種類微生物轉(zhuǎn)移至1000kd透析袋中，置于相同培養(yǎng)基中 培養(yǎng)24小時(shí)后，無菌取出各透析袋中含有細(xì)菌的培養(yǎng)基，活菌計(jì)數(shù)確定各透析袋中微生物 數(shù)量，進(jìn)而確定不同微生物之間的相互促進(jìn)或拮抗作用；

（6）根據(jù)步驟（1）、（2）、（3）中得到的結(jié)果，將不同種類微生物分別置于5kd、10kd、 25kd、1000kd透析袋中，相同孔徑的透析袋置于相同培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)后，無菌取出各透 析袋中含有細(xì)菌的培養(yǎng)基，活菌計(jì)數(shù)確定各透析袋中微生物數(shù)量，進(jìn)而確定不同孔徑蛋白 對(duì)微生物之間的相互促進(jìn)或拮抗作用。