[發明專利]蛋白質構象變化的生物正交拉曼原位檢測方法在審
| 申請號： | 201511009815.7 | 申請日： | 2015-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN106932375A | 公開（公告）日： | 2017-07-07 |
| 發明（設計）人： | 陳興;李婭婭;洪森煉;林亮;肖明;杜逸飛 | 申請（專利權）人： | 北京大學;陳興 |
| 主分類號： | G01N21/65 | 分類號： | G01N21/65 |
| 代理公司： | 北京連和連知識產權代理有限公司11278 | 代理人： | 李延容 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蛋白質 構象 變化 生物 正交 原位 檢測 方法 | ||
1.一種使用生物正交拉曼報告基團特異性標記、檢測蛋白質的方法，其特征在于，包括如下步驟：
a)制備攜帶生物正交拉曼報告基團的非天然氨基酸；
b)利用基因擴展技術，將步驟a)制備的非天然氨基酸插入目標蛋白質，從而實現對目標蛋白質進行生物正交拉曼報告基團標記；
c)利用生物正交拉曼技術對步驟b)得到的蛋白質進行檢測。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物正交拉曼報告基團為炔基、疊氮、氰基或碳氘鍵。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括利用金納米離子的表面增強效應。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述利用金納米離子的表面增強效應中的金納米顆粒AuNPs通過采用檸檬酸鈉還原法制備。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，檸檬酸鈉還原法中所用的HAuCl4的終濃度為0.25mM，檸檬酸鈉的終濃度為0.01％(w/w)。
6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括增加蛋白與AuNPs的親和力。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述增加蛋白與AuNPs的親和力包括使用含半胱氨酸的標簽、含甲硫氨酸的標簽或蛋白化學修飾上含巰基的小分子。
8.一種使用生物正交拉曼技術體外檢測蛋白構象變化的方法，其特征在于，包括如下步驟：
a)在不同溶液條件下，利用權利要求1-7中任一項所述的方法檢測蛋白質構象變化；
b)在基于步驟a)檢測蛋白質構象變化的基礎上，研究蛋白質構象變化和環境改變關系。
9.一種使用生物正交拉曼技術在活細胞原位檢測蛋白構象變化的方法，其特征在于，包括如下步驟：
a)利用權利要求1-7中任一項所述的方法檢測活細胞表面的蛋白質構象變化；
b)在基于步驟a)檢測蛋白質構象變化的基礎上，在活細胞層面上，原位研究蛋白質構象變化和其蛋白質活性受刺激調節的關系。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述刺激包括生長因子刺激、配體刺激或環境改變刺激。
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