[發(fā)明專利]一種檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的引物及其方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201511009416.0
• 申請(qǐng)日: 2015-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN105506099A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 燕啟江;胡昌明;梁耀銘;于世輝;趙薇薇;郭周萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州金域檢測(cè)科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的引物，其特征在于：包括PCR擴(kuò)增引物和SNaPshotPCR引 物；所述PCR擴(kuò)增引物為：針對(duì)ITPA的上游引物5’-GGAGATGGGCAGCAGAGTTA-3’和下游引物 5’-CAGGTCACAGGAAGACAGAGA-3’；所述SNaPshotPCR引物包括：針對(duì)ITPA0101的SNaPshot PCR引物5’-AAAAAAAAAAAAGATCGATCGAGAAATCCAACCATCTTTTAAAAA-3’，針對(duì)ITPA7354的 SNaPshotPCR引物5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATATTTTCTGTGCCACCAAAGTGCAT G-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的引物，其特征在于：所述SNaPshotPCR 引物中ITPA0101和ITPA7354的引物濃度比為1:1。

3.一種檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1提取DNA樣品；

S2以步驟S1提取的DNA樣本為模板，采用權(quán)利要求1中所述的PCR擴(kuò)增引物進(jìn)行多重PCR 擴(kuò)增，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化；

S3以步驟S2純化后的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，采用權(quán)利要求1中所述的SNaPshotPCR引物 進(jìn)行SNaPshotPCR擴(kuò)增，并對(duì)SNaPshotPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化；

S4采用毛細(xì)管電泳技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，確定SNP位點(diǎn)及其基因型。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的同時(shí)檢測(cè)IL28B和ITPA基因多態(tài)性的方法，其特征在于：所述 步驟S1中的DNA樣品為EDTA抗凝外周血的DNA樣品。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S2中的多 重PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件包括：階段1：98℃3min；階段2：98℃10s；階段3：58℃30s；階段4：72 ℃1min；階段5：返回到階段2，29個(gè)循環(huán)；階段6：72℃5min；階段7：25℃保溫。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S3中的 SNaPshotPCR擴(kuò)增反應(yīng)條件包括：階段1：96℃10s；階段2：55℃5s；階段3：60℃30s；階段 4：返回到階段1，25個(gè)循環(huán)；階段5：4℃保溫。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S4中采用 GENEMAPPERIDV4.1軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性的引物在制備檢測(cè)ITPA基因多態(tài)性試劑 中的用途。