[發明專利]DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19及其作為免疫調節劑的應用

有效

• 申請號: 201511009125.1
• 申請日: 2015-12-25
• 公開（公告）號: CN105566461B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 彭宣憲;李惠;楚曉
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C07K14/28
• 分類號: C07K14/28;C07K14/195;C07K14/245;C12N15/31;A61K39/106;A61K39/02;A61K39/108;A61P31/04
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

本發明屬于DNA改組技術領域，具體公開了DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs?19及其作為免疫調節劑的應用。發明首次采用DNA改組技術結合免疫學研究，以溶藻弧菌、副溶血弧菌、遲緩愛德華氏菌以及大腸桿菌的外膜蛋白OmpA為研究對象，通過DNA改組技術獲得DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs?19，其氨基酸序列如如SEQ ID NO：2所示。DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs?19對溶藻弧菌具有較高的免疫保護作用，其相對免疫保護率（RPS）為100%。此外，還顯示出對遲緩愛德華氏菌的交叉免疫原性，其免疫保護率（RPS）達到85.71%。這些結果說明19號改組OmpA（ompAs?19）可作為疫苗組分。

技術領域

本發明涉及DNA改組技術領域，具體涉及DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19及其作為免疫調節劑的應用。

背景技術

在水產動物養殖中，往往使用各種化學藥物和抗生素來控制有關疾病, 但長期用藥, 不僅導致病原菌的抗藥性越來越明顯, 而且使藥物殘留的危害也日益顯現，嚴重地影響水產品安全，所以通過疫苗進行免疫預防更受到高度重視。目前我國水產養殖業的主要病原菌是弧菌和遲鈍愛德華氏菌，而目前無針對多種細菌的多價高效疫苗，因此，研制以具有免疫保護作用的高效多價疫苗具有廣闊的應用前景。

研究已經發現細菌外膜蛋白OmpA具有良好的免疫原性，不僅可以刺激體液免疫，而且對細胞免疫亦有刺激作用。但是外膜蛋白OmpA僅僅對同種細菌具有良好的免疫調節功能，對其他細菌的免疫調節功能較低。如溶藻弧菌OmpA針對溶藻弧菌感染時保護率達到87.5%，而副溶血弧菌OmpA對溶藻弧菌感染時保護率僅為35.6%；副溶血弧菌和遲緩愛德華氏菌的OmpA在針對自身細菌感染時保護率僅為40%左右。我國養殖魚類個體偏小，從經濟效率和實際操作來考慮，也難以對常見病原菌逐一進行疫苗免疫。

DNA改組技術可以在分子水平上對基因進行體外有性重組，由此改變單個基因或基因家族原有的核苷酸序列，創造新基因并賦予表達產物新功能，推動了生物工程的諸多領域突飛猛進地向前發展。但目前尚無用該技術獲得多效多價疫苗的研制的報道。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的上述不足，提供一種DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19。

本發明的另一個目的是提供DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19作為免疫調節劑的應用。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19，編碼該蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19，其氨基酸序列如如SEQ ID NO：2所示。

SEQ ID NO：2所述的DNA改組后的細菌外膜蛋白ompAs-19在制備動物免疫調節劑中的應用。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

本發明首次采用DNA改組技術結合免疫學研究，以溶藻弧菌、副溶血弧菌、遲緩愛德華氏菌以及大腸桿菌的外膜蛋白OmpA為研究對象，通過DNA改組技術獲得改組OmpA基因，進一步構建了原核表達的改組OmpA質粒庫；通過SDS-PAGE鑒定獲得43個能正確表達的改組OmpA基因；將所有這些改組OmpA基因構建真核表達的改組OmpA質粒庫，即DNA疫苗；最后用斑馬魚作為模式動物深入研究其免疫保護性。免疫和攻毒實驗結果表明19號改組OmpA基因（ompAs-19）對溶藻弧菌具有較高的免疫保護作用，其相對免疫保護率（RPS）為100%。此外，還顯示出對遲緩愛德華氏菌的交叉免疫原性，其免疫保護率（RPS）達到85.71%。這些結果說明19號改組OmpA（ompAs-19）可作為疫苗組分。

附圖說明