本發明涉及一種雪松松針總黃酮的富集方法，該方法包括以下步驟：⑴將新鮮雪松松針置陰涼處晾干，得到干燥的雪松松針；該干燥的雪松松針經回流提取、過濾，得到雪松松針提取液；⑵雪松松針提取液經減壓回收，得流浸膏；⑶流浸膏分散于水中，經超聲溶解、離心分離，得到雪松松針總黃酮粗提液；⑷大孔樹脂濕法裝柱后，將雪松松針總黃酮粗提液調pH至3~6，然后上樣，上樣完成后先用水洗除雜，然后用體積濃度為60~90%的乙醇洗脫，收集洗脫液；⑸洗脫液經減壓濃縮、干燥，即得含量超過50%的雪松松針總黃酮。本發明還公開了該總黃酮在抗腫瘤中的應用。本發明方法簡單、易于實施。
技術領域
本發明涉及中藥、天然藥物制藥領域，尤其涉及一種雪松松針總黃酮的富集方法及其在抗腫瘤中的應用。
背景技術
雪松Cedrus deodara (Roxb.) G. Don是松科Pianaceae植物雪松屬Cedrus Trew樹種的泛稱，又稱喜馬拉雅雪松、喜馬拉雅杉、香柏。該屬共有4種，包括雪松Cedrus deodara (Roxb.) G. Don、黎巴嫩雪松Cedrus libani Rich.、短葉雪松Cedrus brevifolia Hook. f.和北非雪松Cedrus atlantica manetti，它們分別間斷分布于喜馬拉雅山、亞洲西部(黎巴嫩、敘利亞和土耳其)、塞浦路斯及北非(摩洛哥和阿爾及利亞)（鄭萬鈞,傅立國《雪松·中國植物志》1978,第七卷,167；Dallimore W, Jackson AB, HarrionSG《A handbook of Coniferae and Ginkgoaceae》, 1966,137）。傳統中醫認為雪松具有祛風活絡、消腫生肌、活血止血之功效；現代藥理證實，雪松具有解痙、鎮痛、抗炎、抗癌、抗菌、抗病毒等多種藥理活性(張軍民,石曉峰,范彬,等《雪松的化學成分及藥理活性研究進展·中成藥》,2009,31(6):928-933)。其針葉藥用歷史悠久，主要化學成分為黃酮類、苯丙素類、有機酸類、三萜類、甾體類、多糖及針葉膠等，其中黃酮類化合物主要為楊梅素、槲皮素、山柰酚、異鼠李素及其它們的苷類（劉東彥,石曉峰,王東東,等《雪松松針黃酮類化學成分的研究·中草藥》, 2011,42(4):631-633；Liu DY,Shi XF, Wang DD, et al《A NewFlavonoid In Pine Needles Of Cedrus Deodara·Chinese Herbal Medicines》,2011,3(1):5-6.；Liu DY,Shi XF, Wang DD, et al《Two New Myricetin Glycosides from PineNeedles of Cedrus deodara ·Chemistry of Natural compound》, 2011,47(5):704-707；劉東彥,石曉峰,李沖,等《雪松松針醋酸乙酯部位化學成分研究·中草藥》,2011,42(10): 1921-1924）；目前采取正交試驗法優選出雪松松針中總黃酮的最佳提取工藝為加無水乙醇30倍量，在40℃下超聲提取3次，每次20min（范彬,石曉峰,沈薇,等《正交試驗法優選雪松松針中總黃酮提取工藝·中國藥師》,2008,11(8):938-940）。雪松松針具有抗腫瘤、抗氧化、改善記憶、抗菌及抗病毒、毒殺蚊蟲等多種功效(白朝輝,石曉峰,劉東彥,等《雪松松針的化學成分及藥理作用研究進展·中國藥師》, 2012,15(12):1791-1793)，其中有關雪松松針抗腫瘤的報道，系雪松枝葉的乙醇提取物中揮發物質對人非小細肺癌(NCI-H460)細胞的抑制作用，當濃度為50μg/mL時，對腫瘤細胞沒有抑制作用，而當濃度增加至 100 μg/mL時，抑制率達到73.45%（卓盼,陳先暉,朱峰,等《雪松枝葉弱極性物質的GC-MS分析及抗腫瘤活性·江蘇農業科學》,2011,39(3):429-431）。雪松松針水溶性提取物顯示出強大的抗氧化活性，對ABTS自由基的IC50為25.5 ± 0.64μg/mL，其水溶性提取物中總酚含量每克相當于31.4±0.53mg沒食子酸，總黃酮含量每克相當于23.1±0.79mg蘆?。╓ei-Cai Zeng,Li-Rong Jia, Yan Zhang,et al《Antibrowning and antimicrobial activities ofwater-soluble extract from pine needles of Cedrus deodara·Journal of FoodScience》,2011, 76(2):318-323）。但未見雪松松針總黃酮的大孔樹脂富集方法及其在抗腫瘤中的應用的相關報道。
