[發明專利]一種檸檬酸發酵工藝

有效

• 申請號: 201511003325.6
• 申請日: 2015-12-28
• 公開（公告）號: CN105385711B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 寇光智;李昌濤;陳祥軍;高曉彤;劉長靜;蔣水星
• 申請（專利權）人: 日照金禾博源生化有限公司
• 主分類號: C12P7/48
• 分類號: C12P7/48;C12R1/685
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻;楊婷

1.一種檸檬酸發酵工藝，其特征在于：采用高溫烘干玉米為原料，并在檸檬酸種子罐及發酵罐培養過程中添加混合氮源及微量元素；其具體步驟為：

(1)將高溫烘干玉米粉碎，調漿，加入耐高溫α-淀粉酶，經二次高壓蒸汽噴射液化后得玉米液化液；

(2)將玉米液化液I和硫酸銨加入種子罐中，加水定容，制備成檸檬酸種子罐培養基，蒸汽消毒后保壓降溫待用；

(3)配制種子罐微量元素溶液，滅菌待用；

(4)將黑曲霉孢子加入無菌水中制成孢子懸浮液并將其接入檸檬酸種子罐培養基進行培養，得種子液；培養過程中通過連續流加方式加入種子罐微量元素溶液；

(5)將玉米液化液II用壓濾機壓濾得到液化清液，將液化清液、玉米液化液III、尿素和玉米漿加入發酵罐中，加水定容制備成發酵罐培養基，蒸汽消毒，保壓降溫后待用；

(6)配制發酵罐微量元素溶液，滅菌后待用；

(7)將培養好的種子液轉入發酵罐培養基進行發酵，發酵過程中通過連續流加的方式加入發酵罐微量元素溶液；

步驟(2)中玉米液化液I與硫酸銨的含氮比為2.5-2.6:1，種子罐培養基中總糖濃度為：9.5-10.5g/100mL，總氮濃度為：0.22-0.24g/100mL；

步驟(3)中種子罐微量元素溶液的具體配置過程為：取CuSO₄·7H₂O 40-50mg，ZnSO₄·7H₂O 35-40mg，MnSO₄·H₂O 30-35mg，Na₂MoO₄·2H₂O 60-70mg，溶于去離子水中，定容至500mL，滅菌待用；

步驟(4)中具體的培養過程為：培養0-6h階段，控制培養溫度：35.0℃；罐壓：0.08MPa；通風比0.10V/(V·min)；攪拌速率：100rpm；培養6-26h階段，控制培養溫度：36.5℃；罐壓：0.10MPa；通風比：0.15V/(V·min)，攪拌速率：200rpm；通過連續流加方式進行流加微量元素；

步驟(5)中發酵罐培養基中總糖濃度為：17.5-18.5g/100mL，總氮濃度為：0.10g/100mL；

步驟(6)中發酵罐微量元素溶液配制：CuSO₄·7H₂O 0.15g-0.20g，ZnSO₄·7H₂O 2.0-2.2g，MnCl₂·4H₂O 0.5-0.6g，FeSO₄·4H₂O 0.3-0.4g，CoCl·4H₂O 0.15-0.20g，Na₂MoO4·2H₂O 0.12-0.15g，和EDTA 2.0-2.5g，溶于去離子水中，定容至500mL，滅菌待用；

步驟(7)中種子液與發酵液的體積比為1:10，具體的發酵過程為：其中0-8h階段，控制培養溫度：36.5℃；罐壓：0.10MPa；通風比：0.1V/(V·min)；攪拌速率：250rpm；8-48h階段，控制罐壓：0.10MPa；通風比：0.18V/(V·min)；攪拌速率350rpm；控制一定的流量流加發酵罐微量元素溶液；48-57h階段，控制罐壓：0.10MPa；通風比：0.15V/(V·min)；攪拌速率300rpm；同時調節發酵罐微量元素溶液的流加量；

所述的玉米液化液I、玉米液化液II和玉米液化液IIII的體積總和為步驟(1)中得到的玉米液化液；玉米液化液I、玉米液化液II和玉米液化液IIII的體積比依次為1:8:2。

2.根據權利要求1所述的一種檸檬酸發酵工藝，其特征在于：步驟(1)中采用55-60℃的水進行調漿，水與玉米的質量比為2.5-3.0:1，玉米液化液的總糖濃度為：20-22g/100mL。

3.根據權利要求1所述的一種檸檬酸發酵工藝，其特征在于：步驟(4)中，每毫升種子液中接入70-80萬個黑曲霉孢子。