[發(fā)明專利]一代育成全雌黃顙魚的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201511000723.2
• 申請日: 2015-12-25
• 公開（公告）號: CN105475202B
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉漢勤;侯昌春;陳麗慧;徐江;趙鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢百瑞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10;A01K67/027
• 代理公司: 北京匯澤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

1.一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以超雄黃顙魚作為父本，以普通黃顙魚雌魚作為母本獲得的受精卵進(jìn)行冷處理誘導(dǎo)獲得全雄三倍體黃顙魚；從性成熟的普通黃顙魚雌魚卵巢中分離卵原細(xì)胞；

(2)將卵原細(xì)胞顯微注射到全雄三倍體黃顙魚仔魚腹腔；

(3)步驟(2)的仔魚性成熟后，生產(chǎn)出供體X染色體的精子，與普通雌性黃顙魚產(chǎn)生的卵子授精后即可獲得全雌黃顙魚。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，所述冷處理誘導(dǎo)的方法為：受精卵在4℃條件下冷處理15min，然后放入23～26℃溫度環(huán)境下繼續(xù)培育，魚苗孵出后，去除畸形魚苗。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，所述分離卵原細(xì)胞的方法為：分離出卵巢，剪碎，用L-15培養(yǎng)基在10℃下培養(yǎng)7～9小時，剔除細(xì)胞塊，剩下的即為卵原細(xì)胞，將其置于L-15培養(yǎng)基中重新懸浮備用；所述L-15培養(yǎng)基包含2mg/mL的膠原酶H和500國際單位的蛋白質(zhì)水解酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，步驟(1)中受精卵為人工授精獲得，首先用催產(chǎn)素對雄魚和雌魚分別進(jìn)行人工催產(chǎn)，然后從雌魚中擠出成熟的卵子，對雄魚進(jìn)行剖腹取精。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，所述催產(chǎn)素包括魚用絨毛膜促性腺激素、魚用促黃體素釋放激素類似物2號和多巴胺拮抗物地歐酮。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，催產(chǎn)雌魚的方法為：待催產(chǎn)的雌魚第一次注射魚用促黃體素釋放激素類似物2號，劑量為15～20μg/kg；經(jīng)過16～18小時后，第二次注射魚用絨毛膜促性腺激素、魚用促黃體素釋放激素類似物2號和多巴胺拮抗物地歐酮的混合物，劑量為每千克雌魚：魚用絨毛膜促性腺激素2500～2900IU，魚用促黃體素釋放激素類似物2號30～34μg，多巴胺拮抗物地歐酮6～10mg；第二次注射后經(jīng)18～22小時的效應(yīng)時間，從雌魚中擠出成熟的卵子。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一代育成全雌黃顙魚的方法，其特征在于，催產(chǎn)雄魚的方法為：待催產(chǎn)的雄魚注射魚用絨毛膜促性腺激素、魚用促黃體素釋放激素類似物2號和多巴胺拮抗物地歐酮的混合物，劑量為每千克雌魚：魚用絨毛膜促性腺激素2500～2900IU，魚用促黃體素釋放激素類似物2號30～34μg，多巴胺拮抗物地歐酮6～10mg；注射后經(jīng)18～22小時的效應(yīng)時間，對雄魚進(jìn)行剖腹取精。