[發明專利]一種用于恩拉霉素微生物效價測定的檢定培養基

在審

• 申請號: 201510998021.1
• 申請日: 2015-12-24
• 公開（公告）號: CN105524975A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 唐陽剛;李敬輝;徐新軍;黃潔云
• 申請（專利權）人: 麗珠集團新北江制藥股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種一種用于恩拉霉素微生物效價測定的檢定培養基，更具體地，本 發明涉及一種檢定恩拉霉素效價的培養基制備方法。

背景技術

恩拉霉素，又名恩來霉素、安來霉素、恩霉素、持久霉素，系1966年自日本兵庫縣西 宮市土壤中分離出來的放線菌StreptomycesfungicidiousNO.B5477發酵產生的一種多 肽類抗生素。恩拉霉素是由包括13個不同種類的17個氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的有 機堿，主要成分為恩拉霉素A和恩拉霉素B，還有少量的C和D組分。

恩拉霉素具有廣泛的抗革蘭氏陽性菌活性、優良的促生長、改善飼料利用率作用 及其低毒低殘留等優點，在臨床上常把恩拉霉素作為禽、豬、魚的抗生素促生長劑。恩拉霉 素作為一種新型肽類抗生素，具有廣譜、無殘留、不產生耐藥性等優點，已成為新型抗生素 的來源。

目前，恩拉霉素含量測定主要有HPLC法和微生物檢定法(管碟法)。HPLC測定恩拉 霉素的文獻如ZL201010226506.6、ZL201010528367.2和ZL201410105471.9等，用恩拉霉 素A和恩拉霉素B作為標準品，雖然HPLC測定恩拉霉素的方法操作相對簡單，但是HPLC測定 恩拉霉素的方法還不是通用標準，國內和國際上還是不太認同該方法，同時涉及的HPLC儀 器價格也比較昂貴。現在我國國家標準和國際上通用的恩拉霉素含量測定標準仍然是微生 物檢定法，可能與恩拉霉素成分復雜，用其中主要成分恩拉霉素A和恩拉霉素B標定的HPLC 方法不能夠完全反應出產品的質量有關。

在公開的關于恩拉霉素檢測方法的文獻中，微生物檢定法(管碟法)耗時長，高濃 度和低濃度抑菌圈差異不顯著，檢測范圍受限等缺陷。朱曦等的《恩拉霉素含量測定方法的 改進》通過對樣品提取、緩沖液及終濃度等檢測條件進行優化，使改進后標準品高濃度抑菌 圈直徑范圍在18-22mm之間，大小圈差異明顯，使得檢測結果更精準。劉雅妮等的《恩拉霉素 預混劑含量測定方法的改進》將《進口獸藥質量標準》檢測方法中pH值4.0的醋酸鹽緩沖液 改為pH值7.8的磷酸鹽緩沖液，將儲備液濃度由1000單位/mL降低為200單位/mL，提取時間 延長至2～3h，對培養基組成、菌濃、緩沖液、樣品提取液和提取時間等檢測條件進行優化， 找出抑菌圈大小合適，邊緣清晰的試驗條件，提高了測定的準確性。雖然如此，但是發明人 發現現有技術的恩拉霉素微生物鑒定法的抑菌圈邊緣模糊的缺陷并沒有沒消除，而測量抑 菌圈直徑是取得試驗結果的重要環節，抑菌圈的模糊會使的測定誤差大。

發明內容

為了克服管碟法的邊緣不清晰的缺陷，本發明提供一種恩拉霉素微生物效價測定 的檢定培養基，更具體地，本發明涉及一種恩拉霉素微生物效價測定的檢定培養基制備方 法，以及新的檢定培養基在恩拉霉素微生物效價測定中的應用。

抑菌圈邊緣清晰度是影響測定結果的主要因素，導致抑菌圈邊緣不清晰的原因有 多種，在抑菌圈形成過程中抗生素的擴散系數紊亂、不均一，不符合動力學公式中各項之間 的關系或各擴散系統交叉，如培養基原材料的成分及質量、pH值、鹽濃度及培養時間均可影 響抑菌圈邊緣的清晰度；多組分抗生素例如恩拉霉素中，各組分抗菌活性的不同，擴散系數 也不同，其交叉作用影響抑菌圈邊緣的清晰度。

一種恩拉霉素檢定培養基，其特征在于所述培養基按重量計包括蛋白胨5份、肉膏 3-5份、NaCl18-20份、磷酸氫二鈉2.2-3.5份、瓊脂14份。

優選的，所述恩拉霉素檢定培養基按重量計包括蛋白胨5份、肉膏4.4份、NaCl20 份、磷酸氫二鈉2.4份、瓊脂14份。

優選的，所述恩拉霉素檢定培養基pH值為7.8-8.1.

一種恩拉霉素檢定培養基，其特征在于所述培養基的制備方法包括：(1)稱取蛋白 胨5份、肉膏3-5份、NaCl18-20份、磷酸氫二鈉2.2-3.5份、瓊脂14份，加蒸餾水使成1000mL 混合物；

(2)用6MNaOH試液調步驟((1)所述的1000mL混合物pH值，使滅菌后1000mL混合物 的pH值為7.9～8.1，混合物分裝。

(3)滅菌：將分裝的混合物高壓蒸汽滅菌，貼上標簽備用。

優選的，所述培養基的制備方法包括：(1)稱取蛋白胨5份、肉膏4.4份、NaCl20份、 磷酸氫二鈉2.4份、瓊脂14份，加蒸餾水使成1000mL混合物；