[發明專利]一種抗CD6單抗T1h的檢測性抗體及應用

有效

• 申請號: 201510993827.1
• 申請日: 2015-12-25
• 公開（公告）號: CN105504062B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 周海平;李曉敏;王婷;張利萍;裴爽;吳俊玲;田睿;白義;白先宏
• 申請（專利權）人: 百泰生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;C12N1/21;C12N1/19;G01N33/68;C12R1/19;C12R1/85
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本發明涉及生物制藥技術領域，具體地說是涉及一種抗CD6單抗T1h的檢測性抗體的獲得方法、制備方法及其檢測方法；本發明通過全合成噬菌體抗體庫的篩選技術，對抗T1h的單鏈抗體進行生物淘選、對抗T1h噬菌體單鏈抗體進行陽性克隆鑒定和梯度稀釋phage ELISA比較抗T1h單鏈抗體的親和力，再對抗T1h全抗體進行制備，獲得了一種新的抗T1h的特異性單克隆抗體，該抗體所述抗體重鏈可變區包含SEQ.1的氨基酸序列，所述抗體輕鏈可變區包含SEQ.2的氨基酸序列。本發明所述抗體用于臨床試驗中血液及其他體液中T1h的濃度檢測，能夠靈敏快速地檢測T1h的血藥濃度，為T1h臨床試驗藥理、藥代分析提供了可靠的研究方法，同時也可以用于中和T1h抗體。

技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，具體地說是涉及抗CD6單抗T1h的檢測性抗體的獲得、制備及其檢測方法。

背景技術

CD6是I型整合膜糖蛋白，是清道夫受體富含半胱氨酸超家族SRCRSF(scavengerreceptor cysteine-rich superfamily)的成員，胞外區有3個富含半胱氨酸的功能區SRCR(scavenger receptor cysteine-rich)，其近膜結構域(SRCR3)含有結合ALCAM的位點。CD6主要通過T細胞表達，與人白細胞活化粘附因子ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule，CD166)相互作用；CD6參與T細胞活化，調節T細胞功能和介導細胞—細胞間的粘附。CD6分子可與TCR/CD3形成復合體，參與免疫突觸(immunological synapse，IS)的形成；成熟型免疫突觸分為中央超級分子活化簇(central supramolecularactivation clusters,C-SMAC)和周邊超級分子活化簇(peripheral supramolecularactivation clusters,P-SMAC)兩部分，CD6分子是中央超級分子活化簇的重要組成成分之一；免疫突觸(IS)的形成是T細胞識別抗原、增殖和活化的關鍵步驟，是機體細胞免疫反應和體液免疫反應的重要組成部分。自身性免疫性疾病的發病機制中，T細胞增殖活化和遷移過程起著重要作用。基于CD6分子在淋巴細胞成熟、活化和增殖中的重要作用，阻斷CD6分子的功能可為類風濕性關節炎、銀屑病等自身免疫的治療提供新的治療手段或方法。

抗CD6的人源化單抗Itolizumab(T1h)于2013年8月印度獲批上市用于慢性斑塊型銀屑病，該單抗結合于CD6的SRCR1功能域，而不阻礙CD6分子與其配體ALCAM(activatedleukocyte cell adhesion molecule，CD166)的結合；但T1h與細胞表面CD6分子形成的免疫復合物通過內在化機制進入細胞內，被胞內溶酶體系統消化降解，降低淋巴細胞表面CD6水平，阻礙CD6分子與TCR/CD3形成免疫突觸(IS)，表現為STAT3,MAPK,AKT信號傳導途徑磷酸化水平減低，淋巴細胞活化和增殖受抑，顯著降低IFN-γ和TNF-α等炎性細胞因子的表達和分泌，從而達到治療自身免疫性疾病的目的。

抗體庫技術為全人源抗體的篩選提供了良好的技術平臺，抗體庫技術繞過了以往單抗研制過程中必須的雜交瘤過程，甚至不需要經過免疫過程即可獲得各種抗體基因及抗體分子片段。噬菌體抗體庫是最早出現也是目前應用最廣泛的抗體庫，噬菌體抗體庫通過噬菌體展示技術將不同特異性的抗體或其功能片段(Fab、Fv、ScFv)表達在噬菌體表面，再用抗原進行篩選；噬菌體抗體庫根據抗體基因的來源分為免疫庫和非免疫庫，非免疫庫又包括天然庫、半合成庫和全合成庫；噬菌體抗體庫的篩選模擬了抗體親和力成熟的過程，通常將抗原包被在固相介質上，加入待篩選的噬菌體抗體庫，通過數輪“吸附-洗滌-洗脫-擴增”的過程(即淘選)直至篩選到高親和力、特異性強的抗體。