[發(fā)明專利]一種高純度胰激肽原酶的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510987584.0
• 申請(qǐng)日: 2015-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN105483103A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高玉梅;張帆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 常州亞環(huán)環(huán)保科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/64
• 分類號(hào): C12N9/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高純度胰激肽原酶的制備方法，其特征在于具體操作步驟為：

（1）取7～10cm厚的農(nóng)村河道淤泥7～8kg，放置在干燥機(jī)中，在65～70℃下干燥處理，當(dāng)河道淤泥中含水量為10～15％時(shí)，停止干燥，取出放入容器中，置于陰涼處自行冷卻至室溫，并使其上下分層，之后用刮刀輕輕刮去上層4～8cm后的河道淤泥，得下層河道腐殖質(zhì)污泥；

（2）取500～600g干燥無霉菌的茶籽，放入清水中反復(fù)清洗，去除表面殘留污物后，平鋪在鋪有紗布的鋼篩中，置于干燥機(jī)中，在溫度為100～105℃下干燥處理15～25min，使得茶籽含水量為3～5％，再將干燥后的茶籽放入燒杯中，加入800～1000mL質(zhì)量濃度為75％的乙醇溶液，混合均勻，置于超聲振蕩儀中，設(shè)置超聲振蕩頻率為20～25KHz，超聲功率為100～150W，超聲振蕩反應(yīng)1～3h，過濾，得濾液；

（3）將上述得到的濾液放入索式抽提器中，抽提50～55min，得濾液抽提液，再將得打的濾液抽提液放入蒸餾裝置中，在55～65℃下水浴加熱35～40min，去除乙醇，得到茶油提取物；

（4）將上述得茶油提取物放入容器中，向其中加入上述步驟（1）得到的河道腐殖質(zhì)污泥，以500～600r/min的轉(zhuǎn)速攪拌20～30min，使其完全混合均勻，得混合物，隨后將得到是混合物放入高速離心機(jī)中，在1200～1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心處理40～45min，去渣，得上清液；

（5）再取500～600g干燥無霉菌的茶籽，放入清水中反復(fù)清洗，去除表面殘留污物后，平鋪在鋪有紗布的鋼篩中，放置于太陽光下翻曬，其中每隔2h翻曬一次，直至茶籽含水量為8～12％為止，隨后將翻曬后的茶籽放入鍋中，在45～55℃下翻炒30～60min，待翻炒完畢，將炒后的茶籽送入螺旋擠出機(jī)中進(jìn)行擠壓、排油，得茶籽麩；

（6）將上述步驟（4）得到的上清液加入到上述得到的茶籽麩中，以300～450r/min的速度攪拌10～15min，使其完全混合，隨后將混合后的物質(zhì)放入蒸鍋中，在90～100℃下蒸煮30～35min，待蒸煮結(jié)束，自行冷卻至室溫，并移入擠壓機(jī)中擠壓成直徑為10～15cm的圓形茶籽麩餅；

（7）取400～800g新鮮冷凍豬胰腺洗凈，用清水反復(fù)搓洗后，置于打漿機(jī)中，打漿3～5min，得豬胰腺漿，隨后將得到的豬胰腺漿置于燒杯中，并向燒杯中加入豬胰腺漿質(zhì)量60～65％的人體唾液，用攪拌棒充分混合均勻，在攪拌過程中，以5～6℃/min的速率程序升溫至58～65℃時(shí)，停止攪拌，得混合物；

（8）將上述混合物進(jìn)行過濾，得濾液，隨后取5～30％的濾液放入容器中，向其中加入55～65g上述步驟（6）得到的圓形茶籽麩餅，攪拌浸泡15～18min后取出，用去離子對(duì)其進(jìn)行淋洗，使得pH值為6～8，收集淋洗液1，再取30～40％的濾液放入燒杯中，向其中加入62～75g上述步驟（6）得到的圓形茶籽麩餅，攪拌浸泡20～25min后取出，用質(zhì)量濃度為0.5mol/L的氯化鈉溶液淋洗3～4h，收集淋洗液2，再取30～60％的濾液放入反應(yīng)釜中，向其中加入100～120g上述步驟（6）得到的圓形茶籽麩餅，攪拌浸泡25～30min后取出，用質(zhì)量濃度為1mol/L的氯化鈉溶液淋洗1～2h，收集淋洗液3；

（9）將上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中，充分混合均勻，向容器中加入20～35mL質(zhì)量濃度為30％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為9～10后，靜置4～6h，待靜置結(jié)束，再在其中加入淋洗液總體積1～2倍質(zhì)量濃度為98％的乙醇溶液，攪拌均勻后，沉淀20～22h，之后收集沉淀物放入布式漏斗中，對(duì)其抽濾，收集濾渣；

（10）將上述收集得到的濾渣放入干燥機(jī)中，在溫度100～110℃下干燥處理30～45min，即可得到一種高純度胰激肽原酶。