[發(fā)明專利]聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶凍干注射劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510979806.4
• 申請日: 2015-12-23
• 公開（公告）號: CN105412942B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 婁競;袁杰;徐秀玲;靳征
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽三生制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號: A61K47/60
• 分類號: A61K47/60;A61K38/44;A61K9/19;A61P19/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供一種治療由人體內(nèi)血尿酸升高而引起的各種疾病的聚乙二醇化重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶凍干注射劑，其特征在于由以下成分組成：為活性成分的聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶、在冷凍或凍干過程種保持蛋白活性和穩(wěn)定的的凍干保護(hù)劑、填充劑、酸堿調(diào)節(jié)劑和維持一定pH值條件的緩沖液。其特點(diǎn)是保持聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶凍干后完整的空間構(gòu)型和生物學(xué)活性，不僅有利于藥物的保存，而且有利于藥物在短時間內(nèi)重溶并且復(fù)性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新的生物制品凍干制劑、制備方法及在相關(guān)治療領(lǐng)域的應(yīng)用，具體地說，本發(fā)明涉及給予由人體內(nèi)血尿酸升高而引起的各種疾病的聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶凍干注射劑。

背景技術(shù)

尿酸是鳥類、爬行類和包括人在內(nèi)的靈長類動物體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物，因?yàn)樵谶@些動物體內(nèi)缺乏以分子氧為受體催化尿酸進(jìn)一步分解為尿囊素、二氧化碳和雙氧水的尿酸氧化酶。尿酸作為人體嘌呤代謝的終產(chǎn)物經(jīng)腎臟排泄，當(dāng)尿酸生成超過腎臟代謝時，例如富嘌呤食物攝入過多以及白血病和淋巴瘤及其化療過程所引起的嘌呤代謝增加或者當(dāng)腎臟處理病理狀態(tài)時使正常產(chǎn)生的尿酸排泄受阻，這兩種狀況都會造成血漿尿酸顯著升高，形成高尿酸血癥。由于尿素及其鹽類在血液中的低溶解度和易沉積性就使得高尿酸血癥會引發(fā)或加劇很多疾病，例如：持續(xù)高尿酸血癥時尿酸結(jié)晶沉積在外周關(guān)節(jié)、滑膜引起的急性炎癥和疼痛是痛風(fēng)的主要病因；尿酸不僅可以刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖，而且還導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙；血漿高尿酸也是動脈粥樣硬化等心血管疾病的重要危險因素；尿酸沉積在腎臟組織，是引發(fā)急性腎衰、腎小管損傷、IgA腎炎的主要原因。

降尿酸的經(jīng)典方案是用別嘌呤醇等黃嘌呤氧化酶抑制劑類藥物降低尿酸生成，或用丙磺舒、苯溴馬龍等藥物促進(jìn)尿酸排泄。黃嘌呤的水溶性低于尿酸，其積累有潛在的危險，黃嘌呤氧化酶抑制劑在初始尿酸濃度太高時療效很差，還能引發(fā)超敏綜合征，表現(xiàn)為發(fā)熱、毒性上皮細(xì)胞壞死溶解、肝炎和嗜酸細(xì)胞增高，死亡率達(dá)20％，另外這類藥和丙磺舒、苯溴馬龍等促尿酸排泄類藥都有明顯肝腎毒性。因此，經(jīng)典的降尿酸治療策略不夠安全而且療效也不夠理想。尿囊素的優(yōu)良水溶性和腎臟對尿囊素的高效排泄能力使尿酸氧化酶成為治療高尿酸血癥及其繼發(fā)癥的理想藥物：臨床研究表明尿酸氧化酶可快速高效降低血清尿酸，且?guī)缀鯖]有毒副作用；在治療腫瘤裂解綜合征時，尿酸氧化酶比別嘌呤醇更安全有效；用于治療痛風(fēng)，能快速分解關(guān)節(jié)處沉積的尿酸從而消除引發(fā)的炎癥和皮膚損傷。

尿酸氧化酶是一種新型的降尿酸藥物，它以促進(jìn)尿酸分解為藥物特征。其中一種重組黃曲霉尿酸氧化酶(商品名：拉布立酶)被歐美批準(zhǔn)用于臨床預(yù)防治療腫瘤溶解綜合征。但是尿酸氧化酶又是一種外源蛋白，直接或重復(fù)使用易引發(fā)抗體降低療效，而且易過敏，需靜脈注射，僅適于短期使用以降低尿酸(如使用拉布立酶治療時間不能超過一個月)。所以對于長期治療，顯然需要長效且無免疫原性的尿酸氧化酶制劑，聚乙二醇化重組尿酸氧化酶能夠解決應(yīng)用天然酶時遇到的這些問題。

本發(fā)明申請人制備的聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶是從產(chǎn)朊假絲酵母中提取基因組DNA，通過PCR擴(kuò)增，設(shè)計特定的引物，從產(chǎn)朊假絲酵母基因組中分離尿酸氧化酶基因，并將其插入到大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒中，得到重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶轉(zhuǎn)化子，再將重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，得到可高效表達(dá)尿酸氧化酶的大腸桿菌工程菌株。再經(jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)，收獲表達(dá)重組重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶的菌體，在經(jīng)過菌體裂解、柱層析純化得到純化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶(詳見發(fā)明專利ZL02819387.3)。純化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶經(jīng)特定的聚乙二醇修飾，修飾后經(jīng)超濾或柱層析方法進(jìn)一步純化，得到聚乙二醇化的重組產(chǎn)朊假絲酵母尿酸氧化酶。

眾所周知早期的對尿酸氧化酶的聚乙二醇修飾會引起尿酸氧化酶蛋白特異性活性的大大降低，僅能保持修飾前蛋白的30％-50％的活力。本發(fā)明選用的PEG連接基團(tuán)修飾后不影尿酸氧化酶特異性的酶活力。