[發(fā)明專利]一種多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑的應用及蛋白疫苗

在審

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• 申請日: 2015-12-23
• 公開（公告）號: CN105497891A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發(fā)明（設計）人: 楊志謀;王玲;楊成彪;王懷民
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/00
• 代理公司: 北京三高永信知識產(chǎn)權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 江崇玉

技術領域

本發(fā)明涉及一種多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑的應用及蛋白疫苗。

背景技術

由自組裝多肽形成的水凝膠具有生物相容性好、生物活性高等特點和優(yōu)點， 相關領域的研究是近20年的熱點。它已經(jīng)在再生醫(yī)學、藥物控釋、分析檢測、 組織工程等方面展現(xiàn)了很高的應用前景。例如，由自組裝多肽形成的水凝膠可 以應用于干細胞的定向分化、軟骨組織的制備、抗癌藥物的可控釋放等。最近， 美國芝加哥大學的JoelCollier教授發(fā)現(xiàn)自組裝多肽可以作為蛋白的疫苗佐劑， 他們將自組裝多肽與短肽抗原或者蛋白抗原共價連接在一起，然后與自組裝多 肽按照一定的比例混合之后一起組裝成納米纖維，隨后將得到的共組裝納米纖 維在小鼠皮下進行免疫試驗。實驗結(jié)果表明：該共組裝體系產(chǎn)生的抗體滴度與 使用弗氏完全佐劑(CFA)時產(chǎn)生的抗體滴度相當，但是所述自組裝多肽本身 (不含短肽抗原和蛋白抗原)單獨使用時并不會提升抗體滴度。由于多肽極佳 的生物安全性，自組裝多肽在疫苗佐劑方面的應用具有很高的應用前景。但是 現(xiàn)有技術需要將抗原與自組裝多肽共價連接，大規(guī)模制備不易。疫苗佐劑是工 業(yè)界疫苗研發(fā)中最為滯后的一環(huán)，截止到目前為止也僅有一種可應用于人體的 佐劑(鋁佐劑)，發(fā)展新型的疫苗佐劑具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的

本發(fā)明的一個目的是提供一種多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑的應用，該水 凝膠具有良好的生物相容性，簡便地與蛋白抗原物理混合后即能很好的刺激機 體產(chǎn)生抗原特異性的體液和細胞免疫應答。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種以上述多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑的蛋 白疫苗。

發(fā)明概述

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供了一種多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑 的應用，所述多肽結(jié)構(gòu)式如(1a)或(1b)所示，

所述多肽水凝膠由結(jié)構(gòu)式如(2a)或(2b)所示的磷酸化多肽水溶液在磷 酸酶催化作用下形成

上述結(jié)構(gòu)式如(1a)所示的多肽為L構(gòu)型，結(jié)構(gòu)式如(1b)所示的的多肽 為D構(gòu)型，磷酸化多肽的序列為Nap-GFFpY-OMe(_pY表示磷酸化酪氨酸)， 結(jié)構(gòu)式如(2a)所示的磷酸化多肽序列為L構(gòu)型，結(jié)構(gòu)式如(2b)的磷酸化多 肽為D構(gòu)型。

本發(fā)明所述磷酸化多肽均可根據(jù)現(xiàn)有技術自制，由FMOC-固相合成方法合 成，Na_p-GFF_pY-OMe的合成方法及其結(jié)構(gòu)可參考文獻1(Nanotechnology,2010, 21(22):225606.)；兩種構(gòu)型的磷酸化多肽可采用相同的合成方法，只需改用 相應構(gòu)型的氨基酸原料。磷酸化多肽水溶液在磷酸酶催化作用下形成所述多肽 水凝膠的方法也為公知技術。

在本發(fā)明的第二方面，還提供了一種以上述多肽水凝膠作為蛋白疫苗佐劑 的蛋白疫苗。所述多肽水凝膠可以方便地與蛋白抗原物理混合得到蛋白疫苗。

發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，該多肽水凝膠可簡便地與蛋白抗原物理混合得到蛋白 疫苗，負載了雞卵清蛋白(OVA蛋白)的多肽水凝膠能很好的刺激機體產(chǎn)生抗 原特異性的體液和細胞免疫應答。其中D構(gòu)型的多肽水凝膠具有更好的佐劑效 果。

本發(fā)明的有益效果是：以生物相容性良好的水凝膠作為蛋白疫苗佐劑，其 可以通過簡便地與蛋白抗原物理混合負載蛋白抗原，負載了蛋白抗原的多肽水 凝膠能很好的刺激機體產(chǎn)生抗原特異性的體液和細胞免疫應答，其中D構(gòu)型的 水凝膠具有更好的佐劑效果。本發(fā)明增加了免疫佐劑的種類，為開發(fā)能應用于 人體的免疫佐劑提供了有價值的信息。

附圖說明

圖1：不含OVA蛋白的L-構(gòu)型多肽水凝膠(L-gel-1)和多肽水凝膠D-構(gòu)型 (D-gel-1)以及物理混合了OVA蛋白的L-構(gòu)型多肽水凝膠(L-gel-2)和D-構(gòu) 型的多肽水凝膠(D-gel-2)的透射電鏡圖像。

圖2：物理混合了OVA蛋白的L-構(gòu)型(L-gel-2)、D-構(gòu)型(D-gel-2)多肽 水凝膠以、OVA以及混有鋁佐劑的OVA(Alum)引發(fā)免疫反應的抗體滴度。

具體實施方式

下面用實施例進一步描述本發(fā)明，但所述實施例僅用于本發(fā)明而不是限制 本發(fā)明。

實施例1