[發明專利]人工肝細胞微流體微囊制備方法及其微流體微囊發生裝置

有效

• 申請號: 201510969672.8
• 申請日: 2015-12-21
• 公開（公告）號: CN105457100B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: 吳紅平;金曉芳;唐為忠
• 申請（專利權）人: 上海賽立維生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/50;A61K41/00;A61K9/50;A61K35/407;A61P1/16;A61J3/00
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 陸林輝

1.一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

A、海藻酸鈉混合溶液的制備：

用生理鹽水溶解海藻酸鈉配制1.5％-2.0％的海藻酸鈉溶液，混入磁性物質，使磁性物質在海藻酸鈉溶液中的重量體積比為1-5mg/mL，用鈷60照射除菌；

再以1：15-30的體積比往上述溶液中加入膠原，混合均勻，4℃冰箱保藏備用；

B、微囊的制備

分散相一AS，為種子細胞充分混勻于步驟A得到的海藻酸鈉混合溶液中得到分散相一；

分散相二IS，1％-3％的氯化鈣溶液，除菌；

連續相OI，不溶于水的油性介質，除菌；

將AS、IS、OI分別裝入注射器中，用微量推注泵推注入微流體通道中；

在微流體通道中形成初級微囊后進入油水分離器，待微囊表面形成一層鈣化的外膜后，進行油水分離，并用生理鹽水洗滌；

移至旋轉成膜臺，依次通過0.1％多聚賴氨酸溶液、生理鹽水、0.15％海藻酸鈉溶液、生理鹽水、55mmol/L的檸檬酸鈉溶液、生理鹽水，得到最終的微囊。

2.根據權利要求1所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，所述的種子細胞為原代人肝細胞、人肝癌細胞株、IPS類肝細胞、原代異體肝細胞。

3.根據權利要求1所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，該方法還包括步驟C：將步驟B獲得的微囊置于37℃、5％CO₂培養箱中孵育。

4.根據權利要求1、2或3所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，步驟B中的油水分離中，在油水分離器底部添加一個0.5-1T的磁場。

5.根據權利要求1、2或3所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，步驟B得到的最終的微囊，粒徑為50--500μm。

6.根據權利要求1、2或3所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，步驟B中油水分離時間為5--15min。

7.根據權利要求1、2或3所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，步驟A中所述的膠原為Matrigel基質膠；磁性物質為粒徑在10nm～100μm的鐵磁性物質或順磁性物質。

8.根據權利要求1、2或3所述的一種人工肝細胞微流體微囊制備方法，其特征在于，步驟B中，IS與AS流速相同，OI流速比IS與AS快。

9.一種微流體微囊發生裝置，其特征在于，該發生裝置包括上樣推進組件、成囊組件、分離成膜組件；

所述的上樣推進組件，包括微量推注泵和三個注射器；

所述的成囊組件，為連續的微流體通道；前端為微流體通道接入端，內置一個連續相通道和兩個分散相通道；后端為中空的波形微流體通道；

所述的分離成膜組件，依次包括油水分離器和旋轉成膜臺；所述的旋轉成膜臺由轉臺和至少六個收集管組成；

所述的微流體通道，采用硅、玻璃、聚甲基丙烯酸甲酯，或聚二甲基硅氧烷微流體芯片經微加工技術建立微流體通道網絡。

10.根據權利要求9所述的一種微流體微囊發生裝置，其特征在于，所述的一個連續相通道和兩個分散相通道分別與三個注射器相連；

所述的波形微流體通道最后伸入油水分離器中。

11.根據權利要求9所述的一種微流體微囊發生裝置，其特征在于，所述的發生裝置，還包括移液管、網兜。

12.一種如權利要求1至8任一項所述的人工肝細胞微流體微囊制備方法在制備人工肝中的應用。

13.一種如權利要求9至11任一項所述的微流體微囊發生裝置在制備人工肝中的應用。