[發明專利]基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因及其在制備豬戊型肝炎病毒樣顆粒中的用途

在審

• 申請號: 201510960640.1
• 申請日: 2015-12-17
• 公開（公告）號: CN105420249A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 蔡雪輝;涂亞斌
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/51
• 分類號: C12N15/51;C12N15/81;C12N1/19;C12N7/04;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

2.一種包含權利要求1所述的基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因的重組表達載體。

3.如權利要求2所述的重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體為甲醇調節型重組酵母表達載體。

4.如權利要求2或3所述的重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體是將權利要求1所述的基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因克隆到酵母表達載體pPIC9K中得到的，所述重組表達載體含有EcoRI和NotI酶切位點，一個強啟動子AOX1啟動子以及一個G418抗性選擇位點。

5.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為包含SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的宿主細胞，或者為包含權利要求2-4中任意一項所述的重組載體的宿主細胞，優選的，所述的細胞為真核細胞，更優選的，所述的細胞為甲醇營養型重組酵母細胞GS115。

6.權利要求1所述的基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因在制備基因4型豬戊型肝炎病毒樣顆粒中的應用。

7.一種制備基因4型豬戊型肝炎病毒樣顆粒的方法，其特征在于是將權利要求1所述的基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因克隆至表達載體，然后將得到的重組表達載體轉化宿主菌，進行重組衣殼蛋白的誘導表達，收集純化即得。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)人工合成基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因，所述的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；

(2)將合成的基因4型豬戊型肝炎病毒結構區衣殼蛋白基因克隆到酵母表達載體pPIC9K中，電轉化GS115感受態細胞后，用MD板及G418+YPD平板篩選，激活培養后經甲醇誘導表達并進行無菌檢驗；

(3)無菌收集培養上清，經過濾或純化后制備重組衣殼蛋白，整個過程中進行蛋白無菌檢驗；

(4)用陽性血清對重組衣殼蛋白其進行免疫檢測；

(5)用電子顯微鏡觀察重組衣殼蛋白形成病毒樣顆粒的情況。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于在步驟(1)所述的基因的5’端加入了EcoRI限制性內切酶位點，在其3’端加入了NotI限制性內切酶位點。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于所述的甲醇誘導表達的條件為每間隔24h加入100％甲醇至甲醇終濃度為0.5～1％(v/v)，即加入量為每毫升培養液中加5～10微升100％甲醇，進行誘導培養，26～30℃250～300轉/min震蕩培養96～120h，收獲培養上清，經過濾或純化后制備重組衣殼蛋白。