[發(fā)明專利]基于小分子探針的熒光光譜法檢測焦磷酸鹽

在審

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• 申請日: 2015-12-21
• 公開（公告）號: CN105445249A
• 公開（公告）日: 2016-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 饒通德;梁麗嬌;陳星
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶三峽學(xué)院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于焦磷酸鹽檢測領(lǐng)域，即通過合成三吡啶的衍生物(4-甲苯-2,2’:6’,2”-三吡啶)作為熒光小分子探針，利用熒光信號變化實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測。

背景技術(shù)

由于焦磷酸鹽(PPi)在生命科學(xué)過程中的許多生物能量過程和代謝過程中，都起著非常重要的作用，能簡單、快速、實時、可靠的對其檢測一直是大家所關(guān)注的熱點，尤其是焦磷酸作為細胞體內(nèi)三磷酸腺苷(ATP)水解的產(chǎn)物，已經(jīng)成為了生物體內(nèi)一種重要的靶物分子；另外，PPi還是DNA酶催化DNA復(fù)制過程中的產(chǎn)物，其檢測已經(jīng)成為一種實時DNA測序的方法；同時，在最近二十年，PPi的檢測在癌癥研究中也起著越來越重要的作用。對磷酸鹽檢測的經(jīng)典方法是磷鉬藍比色法及其相關(guān)的方法，但這些方法僅適用于樣品中含量在0.02～10.0mg/L的磷酸鹽的測定。生物臨床技術(shù)中常用酶標記等方法來得到血清中PPi的濃度，該方法雖然較為靈敏和可靠，但是卻會涉及到放射性試劑的使用。

基于此，本技術(shù)利用小分子物質(zhì)作為熒光探針，利用熒光信號變化實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測，該方法不僅簡單、快速、操作方便，且該方法基于金屬螯合作用，能夠很好地避免其他共存陰離子帶來的競爭作用以及消除溶劑分子的影響，彌補了現(xiàn)有技術(shù)的不足。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種基于小分子探針的熒光光譜法檢測焦磷酸鹽，不僅具有熒光光譜法簡單、快速和操作方便等優(yōu)點，而且該方法基于金屬螯合作用，能夠很好地避免其他共存陰離子帶來的競爭作用以及消除溶劑分子的影響。

為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

基于小分子探針的熒光光譜法檢測焦磷酸鹽，其特征在于：方法如下：制備一種三吡啶的衍生物(4-甲苯-2,2’:6’,2”-三吡啶)作為小分子探針，通過核磁共振波譜、紅外光譜和質(zhì)譜法等檢測手段對合成的小分子物質(zhì)進行表征，利用熒光信號變化實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測。

作為一種優(yōu)化的技術(shù)方案，所述三吡啶的衍生物在與鋅離子絡(luò)合之后產(chǎn)生鋅離子絡(luò)合物，鋅離子絡(luò)合物的熒光光譜可以與其他金屬離子進行有效區(qū)分，且這種鋅離子絡(luò)合物又可以進一步應(yīng)用于堿性條件下焦磷酸鹽高選擇性識別。

作為一種優(yōu)化的技術(shù)方案，所述鋅離子的加入使得三吡啶的衍生物原本位于376nm的熒光峰得到較大增強，同時伴隨著波長一定的紅移；焦磷酸鹽的進一步加入則引起該熒光峰再一次藍移；吸收光譜和熒光光譜測定結(jié)果表明其他磷酸鹽陰離子不能引起鋅離子絡(luò)合物發(fā)生與焦磷酸鹽類似的熒光變化，由此高選擇性識別焦磷酸鹽，實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測。

由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明不僅具有方法簡單、快速和操作方便，而且基于金屬螯合作用還可以較好消除其他陰離子或溶劑分子所帶來的干擾。

同時下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步說明。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一種實施例中基于三吡啶的衍生物與鋅離子作用前后吸收(A-B)和熒光光譜(C-D)的變化的對比示意圖；

圖2為本發(fā)明一種實施例中不同濃度的焦磷酸鹽與鋅離子絡(luò)合物反應(yīng)前后吸收光譜(A)和熒光光譜(B)的變化的對比示意圖。

具體實施方式

實施例：

基于小分子探針的熒光光譜法檢測焦磷酸鹽，方法如下：制備一種三吡啶的衍生物[(4-甲苯-2,2’:6’,2”-三吡啶(簡稱mptpy)]作為小分子探針，三吡啶的衍生物在與鋅離子絡(luò)合之后產(chǎn)生鋅離子絡(luò)合物，鋅離子絡(luò)合物的熒光光譜可以與其他金屬離子進行有效區(qū)分，且這種鋅離子絡(luò)合物又可以進一步應(yīng)用于堿性條件下焦磷酸鹽高選擇性熒光識別，通過核磁共振波譜、紅外光譜和質(zhì)譜法等檢測手段對合成的小分子物質(zhì)進行表征，利用熒光信號變化實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測。

在上述方法中，如圖1所示，所述鋅離子的加入使得三吡啶的衍生物原本位于376nm的熒光峰得到較大增強，同時伴隨著波長一定的紅移。如圖2所示，焦磷酸鹽的進一步加入則引起該熒光峰再一次藍移。吸收光譜和熒光光譜測定結(jié)果表明其他磷酸鹽陰離子不能引起鋅離子絡(luò)合物發(fā)生與焦磷酸鹽類似的熒光變化，由此高選擇性識別焦磷酸鹽，實現(xiàn)焦磷酸鹽的定量檢測。。