[發(fā)明專利]一種草莓專用抗重茬生物有機肥的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510948301.1
• 申請日: 2015-12-17
• 公開（公告）號: CN105439657B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹秋芬;肖蓉;聶園軍;張春芬;董艷輝;李建軍;李亞莉;鄧舒;武凱;李倩
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心;山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所;山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與經(jīng)濟研究所
• 主分類號: C05F15/00
• 分類號: C05F15/00;C05F17/00
• 代理公司: 太原晉科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 王瑞玲

1.一種草莓專用抗重茬生物有機肥的制備方法，其特征在于：將畜禽糞和食用菌栽培后的菌渣混合，用解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2、沼澤紅假單胞菌（Rhodop seudanonas palustris）和黑曲霉( Aspergillus nige )發(fā)酵食用菌栽培后的菌渣和畜禽糞的混合物，即為草莓專用抗重茬生物有機肥，具體制備方法如下：

（1）肥料混合：將食用菌栽培后的菌渣與牛糞按重量比1:1混合均勻，調(diào)整C/N比值為20~30，pH值調(diào)至中性，水分調(diào)節(jié)至55-65%；

（2）菌劑的制備：

A.解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2菌液的制備：4℃保存的解淀粉芽孢桿菌JN2接種于羧甲基纖維素鈉液體培養(yǎng)基上37℃，100~150rpm搖床培養(yǎng)過夜，制備成種子液；

將種子液按體積比1%~5%的接種量接種于發(fā)酵罐中滅菌的羧甲基纖維素鈉液體培養(yǎng)基中，罐內(nèi)壓保持0.02-0.04MPa，溫度37℃，溶解氧1.8±0.2mg/L，轉(zhuǎn)速150r/min，發(fā)酵培養(yǎng)兩天，得到JN2發(fā)酵液，檢測發(fā)酵液中有效活菌數(shù)為4×10⁸cfu/mL；

B.沼澤紅假單胞菌（Rhodop seudanonas palustris）菌液的制備：GH培養(yǎng)基裝滿整支試管，將沼澤紅假單胞菌菌種無菌條件接種于GH培養(yǎng)基中，溫度30℃，光照強度5000Lx靜置厭氧培養(yǎng)，至菌液變?yōu)樯罴t色即得種子液；

將沼澤紅假單胞菌擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件與制備種子液的方法相同；當(dāng)菌液顏色變成深紅色時，得到沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液，檢測發(fā)酵液中有效活菌數(shù)為4×10⁸cfu/mL；

C.黑曲霉( Aspergillus nige )菌劑的制備：黑曲霉菌種接種于普通PDA固體培養(yǎng)基平板上，28℃溫度倒置黑暗培養(yǎng)，待長出新鮮菌絲后，挑菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28℃，100~150rpm搖床培養(yǎng)，待培養(yǎng)基中長出大量菌絲團后，即獲得黑曲霉種子液；

將小麥麩皮灑水拌勻，制成含水率55-65%的麩皮培養(yǎng)基，110-120℃高壓滅菌后冷卻，按每千克麩皮培養(yǎng)基接入150mL菌液的比例接入黑曲霉種子液，攪拌均勻，28℃靜置培養(yǎng)至大量孢子產(chǎn)生時停止培養(yǎng)，將培養(yǎng)物置于30℃烘箱內(nèi)烘干后即得黑曲霉菌粉；

（3）接種微生物發(fā)酵：按每平方米混合肥料中接入10kg的比例向混合肥料中加入黑曲霉菌粉，拌勻后堆置發(fā)酵，當(dāng)溫度低于50℃時翻堆后繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵時間為30~45天；發(fā)酵完成后，按每平方混合肥料中接入10L的比例分別加入解淀粉芽孢桿菌菌液和沼澤紅假單胞菌菌液，調(diào)整pH值為6~7，水分含量為55-65%，攪拌均勻后，攤成15-25cm的薄層進行第二次發(fā)酵，控制溫度為25~30℃，發(fā)酵7~10天后，將其攪拌均勻風(fēng)干至含水率≤15%，即得到草莓專用抗重茬生物有機肥；

所述解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為：CGMCC No:10677，保藏日期為：2015年4月1日，保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼為100101。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種草莓專用抗重茬生物有機肥的制備方法，其特征在于：所述羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基配方為：羧甲基纖維素鈉15g/L，酵母粉1g/L，磷酸二氫鉀1g/L，硝酸銨1g/L，硫酸鎂0.5g/L；所述GH培養(yǎng)基配方為：磷酸二氫鉀1g/L，乙酸鈉1g/L，硫酸鎂0.5g/L，硫酸銨1g/L，氯化鈉1g/L，氯化鈣0.1g/L，琥珀酸鈉1g/L，酵母粉0.5g/L，蛋白胨0.5g/L，pH值6.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種草莓專用抗重茬生物有機肥的制備方法，其特征在于：所制備的草莓專用抗重茬生物有機肥總有效活菌數(shù)含量≥4×10⁸CFU/mL。