[發明專利]一種梨樹離體葉片體細胞胚誘導快繁培養方法

在審

• 申請號: 201510939742.5
• 申請日: 2015-12-16
• 公開（公告）號: CN105557522A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 青島百瑞吉生物工程有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 賀翔

技術領域

本發明涉及一種梨樹離體葉片體細胞胚誘導快繁培養方法，屬于植物學領域。

背景技術

梨樹是薔薇科梨屬，多年生落葉果樹，喬木,在全球均有廣泛分布，全世界約有35 個原生種，野生分布于歐、亞及非洲，分類上分為東方梨及西洋梨兩大類。中國梨栽培面積 和產量僅次于蘋果。

梨樹為一種具有較高開發價值的樹種，目前，通常采用的繁殖方式為扦插繁殖，而 此種繁殖方式易感染葉斑病等真菌性病害，春夏季其又易受蚜蟲危害，其病毒嚴重，葉片花 斑易脫落，良種化程度降低；而劣質種苗的使用又導致梨樹固有的優良特性日益喪失，這在 一定程度上約束了該樹種的發展和推廣應用，因此,選擇、繁育優良梨樹品系成為一個十 分突出的生產問題,組培快繁是梨樹良種產業化的一種有效途徑，相關方面的報道也較 多，但有關梨樹葉片直接誘導體細胞胚及再生快繁系統的技術研究未見有成功的報道。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種能夠有效為生產上提供量 大質優、提純復壯的梨樹離體葉片體細胞胚誘導快繁培養方法。

為了實現上述發明目的，本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種梨樹離體葉片體細胞胚誘導快繁培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）選材：于春季選取生長健壯、性狀表現優良的單株，剪取嫩枝，經清洗、滅菌處理后， 剪取1-2cm莖段，將莖段插入芽啟動培養基上，在培養室溫度白天22±2℃，夜晚18±2℃， 光照強度1500—2000lx，光照時間12h／d的條件下，進行30-40d的培養，形成無菌試管苗；

（2）無菌試管苗增殖培養：將步驟（1）誘導出的無菌試管苗去掉基部葉片，切成含1-2個 腋芽的莖段接種在試管苗增殖培養基上，22-25d后繼代1次，形成梨樹無菌試管苗再生體 系；

（3）誘導體胚形成培養：以試管苗第2-4片展開葉為外植體，接種在誘導體胚形成培養 基上，暗培養15-20d，誘導不定芽的形成；

（4）體細胞胚的生長與分化培養：將誘導體胚形成培養基培養的外植體轉接到體細胞 胚的生長與分化培養基上，然后暗室培養40-45d，中間繼代一次，外植體上形成許多叢生 芽；

（5）壯苗生根培養：將步驟（4）生長發育且長度為5-6cm的叢生芽切成單株轉接到壯苗 生根培養基上，培養30-35d，根長至2cm以上時，進行煉苗移栽，然后在新根新芽萌出后，移 栽到種植地進行常規管理。

進一步，所述的芽啟動培養基為：1/2改良SH+0.5～0.8mgL^-16-BA+3～5mgL^-12,4-D+0.1～0.2mgL^-1NAA+6.0～7.0gL^-1瓊脂+30gL^-1蔗糖+0.1～0.3%phytagel, 且pH值為5.8～6.0。

所述的試管苗增殖培養基為：1/2改良SH+0.5～1.0mgL^-16-BA+1～2mgL^-12, 4-D+0.3～0.5mgL^-1NAA+6.0～7.0gL^-1瓊脂+30gL^-1蔗糖+0.1～0.3%phytagel,且pH 值為5.8～6.0。

所述的誘導體胚形成培養基為：1/2改良MS+0.5～1.0mgL^-16-BA+0.3～ 0.5mgL^-12,4-D+0.5～1.0mgL^-1NAA+6.0～7.0gL^-1瓊脂+30gL^-1蔗糖+0.1～0.3% phytagel,且pH值為5.8～6.0。

所述的體細胞胚的生長與分化培養基，其特征在于，包括1/2改良MS+1.0～1.5 mgL^-16-BA+0.5～1.0mgL^-12,4-D+2.0～3.0mgL^-1KT+6.0～7.0gL^-1瓊脂+20gL^-1蔗糖 +2.0～2.5%phytagel；