[發(fā)明專利]衍生化HPLC?DAD法測定藥物中小分子鹵代羧酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510933250.5
• 申請日: 2015-12-15
• 公開（公告）號: CN105758984B
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭楓;柳文媛;侯德勝;馮鋒
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司32218
• 代理人: 傅婷婷,夏平

1.衍生化HPLC-DAD法測定小分子鹵代羧酸的方法，其特征在于包含以下步驟：

（1）在常溫下，使用硝基苯肼類衍生化試劑對小分子鹵代羧酸衍生化反應(yīng)，生成在320-450nm有較強(qiáng)吸收的產(chǎn)物；

（2）以步驟（1）中衍生化反應(yīng)產(chǎn)物，利用HPLC-DAD法，基于反相分配色譜法原理，在320-450nm測定其中鹵代羧酸的衍生化產(chǎn)物，從而實現(xiàn)對小分子鹵代羧酸的定性或定量檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包含以下步驟：

（1）在常溫下，以乙腈-水為反應(yīng)體系，使用硝基苯肼類衍生化試劑，以碳二亞胺類偶聯(lián)劑的鹽酸鹽為活化劑，對小分子鹵代羧酸衍生化反應(yīng)生成在330～420 nm有較強(qiáng)吸收的產(chǎn)物；

（2）以步驟（1）中衍生化反應(yīng)產(chǎn)物，利用HPLC-DAD法，基于反相分配色譜法原理在330～420 nm測定其中鹵代羧酸的衍生化產(chǎn)物，從而實現(xiàn)對小分子鹵代羧酸的定性或定量檢測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的小分子鹵代羧酸為鹵素取代的C1~C6的羧酸；所述的碳二亞胺類偶聯(lián)劑選自二環(huán)己基碳二亞胺，N,N'-二異丙基碳二亞胺，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺中的任意一種；硝基苯肼類衍生化試劑選自2-硝基苯肼鹽酸鹽、3-硝基苯肼鹽酸鹽、4-硝基苯肼鹽酸鹽和2，4-二硝基苯肼中的任意一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述的小分子鹵代羧酸選自氯乙酸、溴乙酸、二氯乙酸、2-氯丙酸、3-氯丙酸或2-溴丙酸中的任意一種；所述的碳二亞胺類偶聯(lián)劑為1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺，所述的硝基苯肼類衍生化試劑為2-硝基苯肼鹽酸鹽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于乙腈-水反應(yīng)體系中乙腈的體積濃度為10%~90%；1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽濃度為1~4 mg/mL， 2-硝基苯肼鹽酸鹽在衍生化反應(yīng)體系中的濃度為0.2～3 mg/mL；衍生化反應(yīng)時間為1~3h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色譜儀；采用反相分配色譜法；以非極性鍵合相為固定相，采用極性流動相，檢測波長位于320-450nm之間。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色譜儀；檢測波長位于330～420 nm之間。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色譜儀；檢測波長位于390~400nm之間。

9.權(quán)利要求1~8中任一項所述的方法在測定藥物中小分子鹵代羧酸中的應(yīng)用。

10.衍生化HPLC-DAD法測定藥物中小分子鹵代羧酸的方法，其特征在于包含以下步驟：

（1）常溫下，在碳二亞胺類偶聯(lián)劑的鹽酸鹽的活化作用下，使用硝基苯肼類衍生化試劑對待測藥物進(jìn)行衍生化反應(yīng)，反應(yīng)液作為樣品進(jìn)樣測定；

（2）以步驟（1）中衍生化反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液作為進(jìn)樣樣品，利用HPLC-DAD法在320-450nm測定其中鹵代羧酸的衍生化產(chǎn)物，從而實現(xiàn)對藥物中小分子鹵代羧酸的定性或定量檢測。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于所述的小分子鹵代羧酸選自鹵素取代的C1~C6的羧酸；所述的碳二亞胺類偶聯(lián)劑鹽選自二環(huán)己基碳二亞胺，N,N'-二異丙基碳二亞胺，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺中的一種；所述的硝基苯肼類衍生化試劑選自2-硝基苯肼鹽酸鹽、3-硝基苯肼鹽酸鹽、4-硝基苯肼鹽酸鹽和2，4-二硝基苯肼中的任意一種。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于所述的小分子鹵代羧酸選自氯乙酸、溴乙酸、二氯乙酸、2-氯丙酸、3-氯丙酸或2-溴丙酸中的任意一種；所述的碳二亞胺類偶聯(lián)劑鹽選自1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺；所述的硝基苯肼類衍生化試劑為2-硝基苯肼鹽酸鹽。

13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于衍生化反應(yīng)的條件為常溫下，以乙腈體積濃度為10%~90%的乙腈-水為反應(yīng)體系，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽濃度為1~4 mg/mL，2-硝基苯肼鹽酸鹽濃度為0.2~3mg/mL，反應(yīng)時間為1~3h。