[發明專利]一種高效制備環黃芪醇的方法

有效

• 申請號: 201510929020.1
• 申請日: 2015-12-15
• 公開（公告）號: CN105566434B
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 王亞;儲浩俠;劉玉;周偉;王佳麗;周雨晴
• 申請（專利權）人: 安徽誠亞生物科技有限公司
• 主分類號: C07J53/00
• 分類號: C07J53/00;C12P33/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫藥化工領域，具體來說是一種高效制備環黃芪醇的方法。

背景技術

環黃芪醇（CAG）為一種來源于中藥黃芪的四環三萜類中環阿屯烷型化合物，分子式為C30H50O5,相對分子量為490.71。環黃芪醇通過對端粒酶的激活作用可以促進淋巴細胞的增殖,從而能夠推遲細胞的老化。而目前市場上CAG作為一種有效的創傷修復藥和唯一具有激活端粒酶起到抗衰老作用的保健品原料在運用。在抗衰老產品市場有不可替代的作用，具有廣闊的市場前景。

黃芪中分離鑒定的皂苷有近20個,大多數為環阿屯烷型四環三萜皂苷,多數皂苷的苷元為環黃芪醇CAG,連接的糖主要有葡萄糖、木糖、鼠李糖，而藥材中天然游離的CAG含量較低，直接從藥材中提取純化CAG的成本較高，所以目前國內的生產工藝均是以高含量的黃芪皂苷為原料，利用各種方法打開糖苷鍵轉化生產環黃芪醇，一般的水解方法會生成大量的副產物黃芪醇，且由于兩者結構相近，在使用HPLC進行含量測定時不易將兩者分開，從而導致測定值比實際值偏高。β-葡萄糖苷酶、β-木糖苷酶分別是專一性對葡萄糖、木糖糖苷鍵的水解酶類， 柚苷酶由β-鼠李糖苷酶和β-葡萄糖苷酶組成，可以同時水解鼠李糖和葡萄糖苷鍵，因為酶解條件溫和、專一性強，效率高，這三種水解酶被廣泛用于碳苷類化合物的水解生產工藝。

目前國內對環黃芪醇的生產方法的相關報道較少，中國發明專利CN103880910A通過氧化、還原、水解、萃取等步驟純化制取環黃芪醇，該方法步驟繁瑣，轉化率低，雜質太多；中國發明專利CN104817610A利用硫酸對中藥黃芪粗提物黃芪甲醇進行水解,在一定水解條件下實現黃芪甲醇向環黃芪醇的轉化，該方法雖然步驟簡單，但是轉化效率很低，并且生產條件要求苛刻，難以實現工業化生產。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中環黃芪醇轉化效率偏低的缺陷，提供一種高效制備環黃芪醇的方法來解決上述問題。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種高效制備環黃芪醇的方法，依次包括以下步驟：

A.發酵：將黃芪總皂苷裝入發酵罐，注入含有復合酶的緩沖液至樣品完全被浸沒，攪拌后進行催化發酵；

B.調堿：催化結束后，將步驟A中得到的發酵液調成堿性溶液，靜置1小時；

C.逆流萃取：將步驟B中得到的發酵液與萃取劑泵入逆流萃取塔進行萃取；

D.將萃取得到的環黃芪醇與萃取劑的混合液真空濃縮。

優選地，所述步驟A中的黃芪總皂苷純度為60%-100%。

優選地，所述步驟A中的復合酶為β-葡萄糖苷酶、β-木糖苷酶、柚苷酶的混合物。

優選地，所述β-葡萄糖苷酶的質量百分比為40%-60%，所述β-木糖苷酶的質量百分比為10%-20%；所述柚苷酶的質量百分比為20%-50%。

優選地，所述催化發酵在35℃-60℃、pH值為4.0-6.0的條件下進行4-6h。

優選地，所述步驟B中堿性溶液pH值為8.0-10.0。

優選地，所述步驟B使用氫氧化鈉或氫氧化鉀或兩者的混合液做為調堿試劑。

優選地，所述步驟C中的萃取劑為二氯甲烷。

優選地，所述步驟C中的發酵液與萃取劑的流速比為1:2-1:6，萃取溫度為20℃-30℃。

優選地，所述步驟D真空濃縮的干燥溫度為20℃-30℃。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：（1）復合酶發酵技術結合連續逆流萃取技術提取純化得到高純度環黃芪醇，轉化率高，產品純度較高；（2）傳統的提取純化工藝需要1天，本發明整個工藝完成時間不超過8個小時，操作過程中溫度低，保證了環黃芪醇的生物活性，提高了生產效率，降低了能耗，生產成本降低50%以上，適宜于工業化生產。

具體實施方式

為使對本發明的結構特征及所達成的功效有更進一步的了解與認識，用以較佳的實施例說明，說明如下：

實施例1

一種高效制備環黃芪醇的方法為：

（1）發酵：將100%的黃芪總皂苷100克裝入發酵罐,注入含有5克復合酶的緩沖液至樣品完全被浸沒,進行催化發酵；所述酶解所用混合酶制劑中β-葡萄糖苷酶為60%；β-木糖苷酶20%；柚苷酶20%；所述酶解時間為6h，溫度為35℃，pH為4.0。

（2）調堿：催化結束后，將步驟（1）中得到的發酵液用氫氧化鈉調至pH值為8.0，靜置1h。