[發明專利]一種脂質體包封體積的測定方法

在審

• 申請號: 201510925435.1
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN105571673A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 劉寶全;葉志強;姜強;李春斌;權春善;范圣第
• 申請（專利權）人: 大連民族大學
• 主分類號: G01F22/00
• 分類號: G01F22/00;G01N21/64
• 代理公司: 大連智高專利事務所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

本發明涉及脂質體包封體積的測定方法，涉及藥物制造領域中脂質體制劑的包封體積的測定。本發明在脂質體制備過程中加入離子溶液，根據離子組成選擇熒光探針，將熒光探針加入脂質體溶液中，根據熒光強度計算脂質體外的離子總量T1；破壞脂質體膜使脂質體內所有離子釋放，利用熒光探針的熒光強度可以測得脂質體膜破壞后溶液中離子總量T2；按公式P_IN(％)＝(T2?T1)/T2計算脂質體的包封體積。與現有技術相比，本發明測定方法簡便、無需分離、透析、凝膠過濾等復雜操作，耗時短，能夠實現脂質體包封體積的快速測定，該方法測定結果準確性高，設備簡單，適用范圍廣，可以用于脂質體產品檢測與制備工藝優化，為脂質體包封水溶性藥物的實際應用起到關鍵作用。

技術領域

本發明涉及一種脂質體包封體積的測定方法，具體涉及藥物制造領域中脂質體制劑的包封體積的測定。

背景技術

脂質體藥物已經成為當前藥物劑型改造的重要方向，因其具有良好的生物相容性，以及可改變被包封藥物體內分布和提高藥物治療指數而備受關注，利用脂質體進行劑型改造不僅可以提高藥物的溶解性、利用效率、降低藥物不良反應，還能進行靶向給藥，有效將藥物輸送到病灶位置專一性地殺傷腫瘤或病灶細胞，同時避免全身用藥對身體造成的損傷。

包封體積是指脂質體內包裹水相的體積占溶液總體積的百分比，當脂質體包封水溶性藥物時，包封體積影響載藥量及藥物在體內的釋放速度、生物分布、藥物代謝動力學特征等，是脂質體藥物藥效評價的重要指標，也是評價與改造脂質體藥物制造工藝的重要依據。目前，包封體積的測定方法主要有：溶質包封法、電子自旋共振法、電導率法、核磁共振法等。溶質包封法是將膜非滲透性標記物加入水化介質，使標記物進入脂質體內，通過測定內外水相標記物信號強度及脂質濃度得包封體積，但非滲透性標記物會存在于整個測定過程中，影響測定結果；電子自旋共振法，需要分離脂質體與外水相探針或對展寬劑溶液的滲透壓及pH有嚴格要求，因此適用范圍窄；電導率法要求選擇標記物必須是電中性、膜不滲透性且不干擾電導率測定的物質；核磁共振法，溫度對結果影響較大，溫度越高，膜滲透性增加，內外水相水德擴散系數逐漸接近，使測定的包封體積值減小；同時上述測定方法有的需要特殊的儀器設備、有的需要進行脂質體與脂質體外溶液的有效分離，因此，現有方法存在步驟復雜、限制性強、成本高等缺陷，缺少直接測量脂質體包封體積的快速測定方法。

發明內容

本發明為解決現有技術中脂質體包封體積測定方法復雜、限制性強的問題，提供了一種脂質體包封體積的快速測定方法，該測定方法不需要進行離心、透析、凝膠過濾等復雜操作，直接將特異性熒光探針加入到脂質體溶液中快速測定脂質體包封體積。用熒光探針代替熒光染料，利用熒光探針的高靈敏性與可開關控制的特性實現脂質體包封體積的快速測定。

為解決脂質體包封體積的快速測定問題，本發明的技術構思是:利用一種不能透過脂質體的水溶性探針進行脂質體包封體積的測定。根據脂質體與包裹藥物特點選擇適宜的離子及其特異性水溶性熒光探針，將離子與脂質體制備過程中的水相混合，這樣離子將在脂質體制備后分散到脂質體內外兩側。取一定量的脂質體溶液，加入熒光探針，由于熒光探針不能透過脂質體，只能存在于脂質體外部，所以熒光探針只檢測脂質體外部的離子。通過測定熒光強度，根據熒光標準曲線與線性回歸方程，可以計算出脂質體外的離子總數。利用表面活性劑破壞脂質體膜，使脂質體包封的離子釋放，再加入熒光探針，測定熒光強度，根據熒光標準曲線與與線性回歸方程，可以計算出脂質體膜破壞后的離子總量，進而可以通過公式計算脂質體的包封體積。

本發明的技術要點是：一種脂質體包封體積的測定方法，在脂質體制備過程中加入離子溶液，根據離子組成選擇熒光探針，將熒光探針加入到脂質體溶液中，根據熒光強度計算出脂質體外的離子總量T1；破壞脂質體膜使脂質體內所有離子釋放，利用熒光探針的熒光強度可以測得脂質體膜破壞后溶液中離子總量T2；按公式(1)計算脂質體的包封體積：

脂質體的包封體積百分數P_IN(％)＝(T2-T1)/T2 (1)。