[發明專利]白及菌根真菌及其應用

有效

• 申請號: 201510921995.X
• 申請日: 2015-12-14
• 公開（公告）號: CN105754864B
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 譚小明;周雅琴;繆劍華;余麗瑩
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;A01C1/02;C12R1/645
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 靳浩

1.一種白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述白及菌根真菌為蠟殼菌目(Sebacinales sp.)菌根真菌菌株YY-51，所述白及菌根真菌于2015年7月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏號為GCMCC NO.11104；其中，所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，包括以下步驟：

步驟一、菌種制備：采用PDA固體培養基培養白及菌根真菌，然后將白及菌根真菌接種于液體培養基中培養得到白及菌根真菌菌絲體；

步驟二、菌絲體擴大培養：采用液體培養基搖床暗培養白及菌根真菌菌絲體7～15天，培養溫度為26±2℃，獲得更多的白及菌根真菌菌絲體；

步驟三、制作共生混合體：將白及種子和白及菌根真菌菌絲體放在包埋劑中，制作得到白及種子和白及菌根真菌的共生混合體；

步驟四、應用：將白及種子和白及菌根真菌的共生混合體播種在育苗盤中或田間，15～30℃下自然光照后萌發；其中，將白及種子和白及菌根真菌的共生混合體播種在育苗盤中的具體方法為：在育苗盤中裝入基質，在所述基質上放置殼斗科碎樹葉，將白及種子和白及菌根真菌的共生混合體播種在殼斗科碎樹葉上，然后再覆蓋厚度為0.2～0.5cm的基質，噴淋澆灌；

其中，所述基質的組成為以下四種之一：質量比為2:0.5～1:1～2的泥炭土、珍珠巖和木屑；質量比為1:0.5～1:1～2的菜園土、珍珠巖和木屑；質量比為1:2～4的砂子和泥炭土或質量比為1:2～4的砂子和腐殖土；所述白及菌根真菌的保藏號為GCMCC NO.11104。

2.如權利要求1所述的白及菌根真菌在促進白及種子萌發中的應用。

3.如權利要求1所述的白及菌根真菌在促進白及種子在田間萌發中的應用。

4.如權利要求1所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述步驟一中得到白及菌根真菌菌絲體具體方法為：先采用PDA固體培養基，培養溫度為26±2℃，暗培養7～15天后，從形成的菌落邊緣挑取小塊，接種到液體培養基中進行搖床暗培養，搖床轉速為100r/min～150r/min，培養溫度為26℃±2℃，暗培養10～20天；

其中，所述液體培養基由葡萄糖、無機鹽以及天然提取液組成，所述無機鹽為MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄，所述天然提取液是土豆提取液、麥麩提取液或燕麥提取液中的一種。

5.如權利要求4所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述液體培養基中葡萄糖的加入量為15g/L～40g/L，所述無機鹽中KH₂PO₄的加入量為1.5g/L～3.0g/L，MgSO₄·7H₂O的加入量為0.5g/L～2.5g/L。

6.如權利要求5所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述無機鹽中KH₂PO₄的加入量為2.0g/L，MgSO₄·7H₂O的加入量為1.5g/L。

7.如權利要求4所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述麥麩提取液的制備方法為：按照30g/L稱量后，加入1L水，煮開后保持30min，4層紗布過濾后，即得到麥麩提取液；

所述土豆提取液的制備方法為：取市售的土豆按照150g/L～300g/L去皮稱量后，切塊，加入1L水，開水煮30min，4層紗布過濾后，即得到土豆提取液；

所述燕麥提取液的制備方法為：燕麥按照20g/L～40g/L稱量后，加入1L水，煮開后保持30min，4層紗布過濾后，即得到燕麥提取液。

8.如權利要求4所述的白及菌根真菌促進白及種子萌發的方法，其特征在于，所述步驟三中，制作得到白及種子和白及菌根真菌的共生混合體的具體方法為：在超凈工作臺上，將白及種子和白及菌根真菌菌絲體放在包埋劑中后，加入10～30滴的吐溫-80或吐溫-20，得到懸浮液，用滴管吸取所述懸浮液，滴入已滅菌的質量分數為2％的氯化鈣溶液中，10～15min后，倒去氯化鈣溶液，用無菌水沖洗20min，即得到白及種子和白及菌根真菌的共生混合體；

其中，所述包埋劑為用水或所述天然提取液作為溶劑，配置得到質量分數為3～4％的海藻酸鈉溶液，加熱使所述海藻酸鈉溶液成溶膠狀態后，在121℃高壓滅菌20min，冷卻后得到包埋劑。