[發明專利]奶粉中三種脂溶性維生素A,E和K1的檢測方法

有效

• 申請號: 201510918999.2
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN105372374B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 嚴麗娟;林立毅;吳敏;徐敦明;張潔;陳鷺平;張志剛;黃志強
• 申請（專利權）人: 廈門出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司35218
• 代理人: 方惠春

1.一種奶粉中脂溶性維生素A,E和K₁的檢測方法，其特征在于，步驟為，

樣品制備：稱取樣品于比色管中，加入溫水溶解定容至刻度后，取部分定容后的樣品溶液于離心管中，加入無水乙醇沉淀蛋白，再加入正己烷提取，加入飽和氯化鈉溶液抑制乳化，混勻后高速離心分層，取最上面的正己烷層氮氣吹干后，用甲醇溶解定容，經0.22μm濾膜過濾后即可；

樣品檢測：將待測樣品和標準工作溶液在液相色譜-串聯質譜儀檢測，分別進樣，獲得以標準工作溶液中維生素A、維生素A醋酸酯、維生素A棕櫚酸酯、維生素E、維生素E醋酸酯、維生素K₁這6種脂溶性維生素的濃度為橫坐標，再以標準溶液中維生素A、維生素A醋酸酯、維生素A棕櫚酸酯、維生素E、維生素E醋酸酯、維生素K₁這6種脂溶性維生素的峰面積為縱坐標的工作曲線；用工作曲線對定量離子進行定量計算獲得待測樣品溶液中6種脂溶性維生素的濃度；維生素A以維生素A、維生素A醋酸酯、維生素A棕櫚酸酯換算成維生素A的總量計算，維生素E以維生素E、維生素E醋酸酯換算成維生素E的總量計算；具體換算方法如下：

C_維生素K1＝C_維生素K1；

其中C_維生素A表示維生素A的濃度，C_{維生素A醋酸酯}表示維生素A醋酸酯的濃度，以此類推；

即得到待測樣品的維生素A、維生素E、維生素K₁的濃度；

所述液相色譜-串聯質譜儀的檢測為，選用水-乙腈為流動相，反相液相色譜柱分離，采用大氣壓化學電離串聯質譜進行檢測，正離子掃描模式，多反應監測MRM檢測，外標法定量；

色譜條件：Phenomenex Kinetex C₁₈色譜柱,100×4.6mm i.d.，粒徑2.6μm；柱溫35℃；流速1.0mL/min；進樣量5μL；流動相為水和乙腈，梯度洗脫程序：0-4.0min，90％乙腈；4.1-18.0min，100％乙腈；18.1-22.0min，90％乙腈；

質譜條件：離子源為大氣壓化學電離源；掃描方式為正離子掃描；檢測方式為多反應監測；噴霧氣65psi，氣簾氣30psi，碰撞氣medium，離子源溫度350℃，電流入口電壓和出口電壓均為10V，駐留時間50ms；監測離子對:維生素A為269.2/92.9和 269.2/213.1、維生素A醋酸酯為269.2/92.9和269.2/213.1、維生素A棕櫚酸酯為269.2/92.9和269.2/213.1、維生素E為431.4/137.1和431.4/165.1、維生素E醋酸酯為473.4/165.1和473.4/207.1、維生素K₁為451.4/171.1和451.4/187.1；化合物保留時間:維生素A為2.33min、維生素A醋酸酯為3.48min、維生素A棕櫚酸酯為16.50min、維生素E為8.01min、維生素E醋酸酯為8.77min,維生素K₁為9.70min；去簇電壓：維生素A為98V、維生素A醋酸酯為62V、維生素A棕櫚酸酯為82V、維生素E為168V、維生素E醋酸酯為201V,維生素K₁為227V；碰撞能量:維生素A為26V和17V、維生素A醋酸酯為26V和17V、維生素A棕櫚酸酯為26V和17V、維生素E為61V和27V、維生素E醋酸酯為50V和24V、維生素K₁為41V和32V。

2.權利要求1所述奶粉中脂溶性維生素A,E和 K₁的檢測方法，其特征在于，所述樣品制備為稱取0.5～2.0g樣品于5～20mL比色管中，加入40～60℃溫水溶解定容至刻度；分取1～2mL于20mL離心管中，加入2～10mL無水乙醇沉淀蛋白，然后加入1～5mL正己烷提取，并加入2～10mL飽和氯化鈉溶液抑制乳化，混勻后5000rpm高速離心，取正己烷層氮氣吹干后，用甲醇溶解定容至1mL或2mL，經0.22μm濾膜過濾后即可。

3.權利要求1所述奶粉中脂溶性維生素A,E和K₁的檢測方法，其特征在于，所述標準工作溶液為10.0μg/mL的維生素A、維生素A醋酸酯、維生素A棕櫚酸酯、維生素E、維生素E醋酸酯和維生素K₁的乙醇溶劑的標準工作溶液。

4.權利要求1所述奶粉中脂溶性維生素A,E和 K₁的檢測方法，其特征在于，所述樣品制備為稱取0.5～2.0g樣品于5～20mL比色管中，加入45℃溫水溶解定容至刻度；分取1～2mL于20mL離心管中，加入2～10mL無水乙醇沉淀蛋白，然后加入1～5mL正己烷提取，并加入2～10mL飽和氯化鈉溶液抑制乳化，混勻后5000rpm高速離心，取正己烷層氮氣吹干后，用甲醇溶解定容至1mL或2mL，經0.22μm濾膜過濾后即可。