[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定性好的尿素試劑及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510915365.1
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN106868097A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 甘宜梧;羅維曉;王進(jìn)
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南泰圣醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: C12Q1/58
• 分類號: C12Q1/58;C12Q1/34;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及尿素檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種穩(wěn)定性好，靈敏度高的尿素檢測試劑，還涉及使用此檢測試劑的檢測方法。

背景技術(shù)

尿素（Urea）是哺乳動物蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。在肝臟通過鳥氨酸循環(huán)合成，主要由腎臟排泄，可自由地從腎小球?yàn)V出。由于尿素的分子量小又易于溶解，擴(kuò)散力極大，故腦脊液、漿膜腔積液、唾液、汗液中的尿素濃度基本一致。血尿素濃度主要受腎功能和蛋白質(zhì)攝入量和分解代謝情況的影響。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道：當(dāng)人體尿素的含量超過了自身的吸收能力之后，將會對人體的肝、腎、肺泡等造成危害。UREA含量增高可見下列三種情況：（1）腎性增高見于急性腎炎、慢性腎炎、中毒性腎炎、嚴(yán)重腎盂腎炎、腎結(jié)核、腎血管硬化癥、先天性多囊腎和腎腫瘤等引起的腎功能障礙。尤其是對尿毒癥的診斷有特殊價(jià)值，其增高程度與病情嚴(yán)重性成正比。（2）腎前性增高見于充血性心力衰竭、重度燒傷、休克、消化道大出血、脫水、嚴(yán)重感染、糖尿病酸中毒、腎上腺皮質(zhì)功能減退、肝腎綜合征等。（3）腎后性增高見于因尿路梗阻增加腎組織壓力，使腎小球?yàn)V過壓降低，如前列腺肥大、腫瘤壓迫所致的尿道梗阻或兩側(cè)輸尿管結(jié)石等。因此，測定血清、血漿或者尿液中的尿素在臨床診斷上具有重要的意義，因此如何選擇一個(gè)簡便、快捷、有效、準(zhǔn)確的檢測方法，是分析方法研究中的重要內(nèi)容。

目前，國內(nèi)外對尿素的測定方法有很多，歸納起來主要有以下幾種：直接比色法、間接比色法、色譜法、中紅外光譜法等。但臨床實(shí)驗(yàn)室測定尿素最常用的方法有二乙酰-肟法、鄰苯二甲醛法、酶偶聯(lián)速率法等。

二乙酰一肟法也叫丁二酮一肟法，該方法的原理是：二乙酰一肟遇酸水解成二乙酰，在強(qiáng)酸加熱條件下，尿素與二乙酰發(fā)生Fearon反應(yīng)生成紅色的原二嗪，試劑顏色深淺與尿素含量成正比。該方法所用試劑原料易獲得且成本低，但在操作時(shí)需加熱煮沸，且線性范圍狹窄，并且所用試劑具有毒性和腐蝕性，易污染環(huán)境。所以該方法只適用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)范操作下進(jìn)行，一般不適用于臨床現(xiàn)場快速檢測。鄰苯二甲醛比色法的原理是：在酸性環(huán)境中，尿素與鄰苯二甲醛的結(jié)合物作用于安替比林生成黃色化合物，后者與偏釩酸根結(jié)合后呈深藍(lán)色，色澤深淺與尿素含量呈正比。該法線性可達(dá)60mmol /L，精密度和準(zhǔn)確度及相關(guān)性都很好，試劑穩(wěn)定成本低，可實(shí)現(xiàn)自動化分析，且變異系數(shù)小，干擾因素少。但該方法的靈敏度較低，對于溶液中微量的尿素不容易檢出，此方法在檢測尿素濃度較低的樣品時(shí)有一定局限性。酶偶聯(lián)速率法原理是脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨在T-酮戊酸和還原型輔酶I( N ADH)存在下，經(jīng)谷氨酸脫氫酶( GLDH)催化生成谷氨酸。同時(shí)，N ADH被氧化成氧化型輔酶I( N AD)。其中N ADH在340nm波長處有吸收峰，其吸光度下降的速度與待測樣品中尿素的含量成正比。此法優(yōu)點(diǎn)是特異性高、快速、結(jié)果準(zhǔn)確精密，是目前測定尿素的首選化學(xué)方法，但是該法試劑穩(wěn)定性較差。

鑒于此，本發(fā)明在酶偶聯(lián)速率法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化反應(yīng)體系，采用咪唑-HCL緩沖液，添加多種穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性，是一種穩(wěn)定的尿素檢測試劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測尿素的試劑及使用該試劑檢測血清尿素含量的方法。該試劑盒采用酶偶聯(lián)速率法，可以有效檢測血清中尿素的含量，具有相關(guān)性好、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

基本原理：

脲酶

尿素 + 2H₂O2NH₄⁺ + 2HCO₃^－

谷氨酸脫氫酶

α-酮戊二酸 + NH₄⁺ + NADH L-谷氨酸 + NAD ⁺ + H₂O。

本發(fā)明是通過以下步驟得到的：

一種尿素檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：

試劑R1中含有：

咪唑-HCL緩沖液_{·······································}100mmol/L，

BSA_{··················································}1g/L，

ɑ-KG_{·················································}8mmol/L，