[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定性好的尿素試劑及檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510915365.1
• 申請(qǐng)日: 2015-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN106868097A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 甘宜梧;羅維曉;王進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南泰圣醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/58
• 分類號(hào): C12Q1/58;C12Q1/34;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及尿素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種穩(wěn)定性好，靈敏度高的尿素檢測(cè)試劑，還涉及使用此檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

尿素（Urea）是哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。在肝臟通過鳥氨酸循環(huán)合成，主要由腎臟排泄，可自由地從腎小球?yàn)V出。由于尿素的分子量小又易于溶解，擴(kuò)散力極大，故腦脊液、漿膜腔積液、唾液、汗液中的尿素濃度基本一致。血尿素濃度主要受腎功能和蛋白質(zhì)攝入量和分解代謝情況的影響。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道：當(dāng)人體尿素的含量超過了自身的吸收能力之后，將會(huì)對(duì)人體的肝、腎、肺泡等造成危害。UREA含量增高可見下列三種情況：（1）腎性增高見于急性腎炎、慢性腎炎、中毒性腎炎、嚴(yán)重腎盂腎炎、腎結(jié)核、腎血管硬化癥、先天性多囊腎和腎腫瘤等引起的腎功能障礙。尤其是對(duì)尿毒癥的診斷有特殊價(jià)值，其增高程度與病情嚴(yán)重性成正比。（2）腎前性增高見于充血性心力衰竭、重度燒傷、休克、消化道大出血、脫水、嚴(yán)重感染、糖尿病酸中毒、腎上腺皮質(zhì)功能減退、肝腎綜合征等。（3）腎后性增高見于因尿路梗阻增加腎組織壓力，使腎小球?yàn)V過壓降低，如前列腺肥大、腫瘤壓迫所致的尿道梗阻或兩側(cè)輸尿管結(jié)石等。因此，測(cè)定血清、血漿或者尿液中的尿素在臨床診斷上具有重要的意義，因此如何選擇一個(gè)簡(jiǎn)便、快捷、有效、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，是分析方法研究中的重要內(nèi)容。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)尿素的測(cè)定方法有很多，歸納起來主要有以下幾種：直接比色法、間接比色法、色譜法、中紅外光譜法等。但臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定尿素最常用的方法有二乙酰-肟法、鄰苯二甲醛法、酶偶聯(lián)速率法等。

二乙酰一肟法也叫丁二酮一肟法，該方法的原理是：二乙酰一肟遇酸水解成二乙酰，在強(qiáng)酸加熱條件下，尿素與二乙酰發(fā)生Fearon反應(yīng)生成紅色的原二嗪，試劑顏色深淺與尿素含量成正比。該方法所用試劑原料易獲得且成本低，但在操作時(shí)需加熱煮沸，且線性范圍狹窄，并且所用試劑具有毒性和腐蝕性，易污染環(huán)境。所以該方法只適用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)范操作下進(jìn)行，一般不適用于臨床現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。鄰苯二甲醛比色法的原理是：在酸性環(huán)境中，尿素與鄰苯二甲醛的結(jié)合物作用于安替比林生成黃色化合物，后者與偏釩酸根結(jié)合后呈深藍(lán)色，色澤深淺與尿素含量呈正比。該法線性可達(dá)60mmol /L，精密度和準(zhǔn)確度及相關(guān)性都很好，試劑穩(wěn)定成本低，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析，且變異系數(shù)小，干擾因素少。但該方法的靈敏度較低，對(duì)于溶液中微量的尿素不容易檢出，此方法在檢測(cè)尿素濃度較低的樣品時(shí)有一定局限性。酶偶聯(lián)速率法原理是脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨在T-酮戊酸和還原型輔酶I( N ADH)存在下，經(jīng)谷氨酸脫氫酶( GLDH)催化生成谷氨酸。同時(shí)，N ADH被氧化成氧化型輔酶I( N AD)。其中N ADH在340nm波長(zhǎng)處有吸收峰，其吸光度下降的速度與待測(cè)樣品中尿素的含量成正比。此法優(yōu)點(diǎn)是特異性高、快速、結(jié)果準(zhǔn)確精密，是目前測(cè)定尿素的首選化學(xué)方法，但是該法試劑穩(wěn)定性較差。

鑒于此，本發(fā)明在酶偶聯(lián)速率法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化反應(yīng)體系，采用咪唑-HCL緩沖液，添加多種穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性，是一種穩(wěn)定的尿素檢測(cè)試劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測(cè)尿素的試劑及使用該試劑檢測(cè)血清尿素含量的方法。該試劑盒采用酶偶聯(lián)速率法，可以有效檢測(cè)血清中尿素的含量，具有相關(guān)性好、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

基本原理：

脲酶

尿素 + 2H₂O2NH₄⁺ + 2HCO₃^－

谷氨酸脫氫酶

α-酮戊二酸 + NH₄⁺ + NADH L-谷氨酸 + NAD ⁺ + H₂O。

本發(fā)明是通過以下步驟得到的：

一種尿素檢測(cè)試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：

試劑R1中含有：

咪唑-HCL緩沖液_{·······································}100mmol/L，

BSA_{··················································}1g/L，

ɑ-KG_{·················································}8mmol/L，