[發明專利]一種定點突變改造的人二肽基肽酶III

有效

• 申請號: 201510908900.0
• 申請日: 2015-12-09
• 公開（公告）號: CN105400755B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 劉大嶺;姚冬生;虞曉丹;謝春芳
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/57;C12N15/63;A61K38/48;A61P35/00;A23K20/189;A23L29/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

本發明涉及一種定點突變改造的人二肽基肽酶III。本發明所述的定點突變改造的人二肽基肽酶III，其特征在于：它是由氨基酸序列為SEQ ID NO.1的人二肽基肽酶III中制造多個氨基酸取代而產生的突變體，所述的氨基酸取代包括第560、562、564位的取代，以致所述定點突變改造的人二肽基肽酶III為對6?甲氧基雙呋喃香豆素具有氧化分解作用的酶。本發明所述的定點突變改造的人二肽基肽酶III可應用于制備飼料及其添加劑或食品及其添加劑中消除6?甲氧基雙呋喃香豆素的產品，還可應用于制備預防由6?甲氧基雙呋喃香豆素誘發的疾病的藥物。

技術領域

本發明涉及一種二肽基肽酶III，特別涉及一種定點突變改造的人來源的二肽基肽酶III。

背景技術

二肽酶III(DPP_S III，EC 3.4.14.4)，如來自酵母的二肽酶III、來自人類的二肽酶III、來自人的二肽酶III、來自兔的二肽酶III等，是一組分子內含有特殊的HEXXGH鋅指結構的金屬蛋白酶，具有水解多肽鏈的氨基末端切掉二肽的肽酶。DPPIII在生理功能上與腦啡肽和血管緊張素II、血管緊張素III、促黑色素等重要的生理活性肽的新陳代謝有關。DPP_S存在于各種哺乳動物的組織中，根據亞細胞的定位、特異性地無核抑制劑的敏感性，二肽基肽酶分成不同的類型DPP I～DPP IV。DPP III可以選擇性地從多肽鏈或蛋白質的N-末端水解掉二肽殘基，如：Arg-Arg-，Ala-Arg-，或者Tyr-Gry。人DPP III由737個氨基酸組成，鋅離子是其催化金屬離子。其氨基酸序列與黃曲霉毒素單加氧酶(Aflatoxinmonooxygenas，AFMO)有54.95％的同源性，但不具有對6-甲氧基雙呋喃香豆素氧化分解的功能。

黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產生的劇毒性次生代謝產物，已經確定的黃曲霉毒素分子的結構主要有八種，其中毒性最強的黃曲霉毒素B1(也稱6-甲氧基雙呋喃香豆素)被認為是潛在的對人類危害極為突出的一類強致癌誘變劑，一次大量攝入會引起人及動物的急性中毒、甚至死亡；小劑量長期攝入會致畸、致突變和致癌，即使幾十ppb的含量仍有極大的毒性；I族黃曲霉毒素含有呋喃雙鍵結構。目前，已經發現的對6-甲氧基雙呋喃香豆素具有分解作用的生物酶極少。黃曲霉毒素單加氧酶(AFMO)是一個對6-甲氧基雙呋喃香豆素有氧化分解作用的酶。經研究發現黃曲霉毒素單加氧酶氧化分解6-甲氧基雙呋喃香豆素的過程為：從底物分子中獲得電子傳遞給氧，使水還原成過氧化氫，將底物氧化并進一步使分子中的呋喃雙鍵開環。在這個過程中，由分子內的變價離子的價態變化來實現電子的傳遞，首先，結合在AFMO上的二價金屬離子奪得底物的一個電子，自身變成一價離子，然后不穩定的一價離子將奪得的這個電子傳遞給氧，自身又轉變成穩定的二價離子，氧氣分子獲得一個電子在水分子的參與下生成過氧化氫，同時底物轉變為它的環氧化物。然后，該環氧化物伴隨著過氧化氫的作用發生氧化水解反應，最終使底物分子中的呋喃雙鍵斷開。黃曲霉毒素單加氧酶是目前已報道的用于黃曲霉毒素解毒的生物酶。因此，發現和制造新的對6-甲氧基雙呋喃香豆素具有氧化分解作用的酶，對發展黃曲霉毒素消減技術具有十分重要的現實意義。

發明內容

本發明的首要目的是提供一種定點突變的人二肽基肽酶III，該人二肽基肽酶III突變體對6-甲氧基雙呋喃香豆素具有氧化分解功能。

本發明所述的一種定點突變改造的人二肽基肽酶III是由氨基酸序列為SEQ IDNO.1的人二肽基肽酶III(NCBI數據庫登錄號為AJ271216.1)中制造多個氨基酸取代而產生的、對6-甲氧基雙呋喃香豆素有氧化分解作用的人二肽基肽酶III突變體，所述的氨基酸取代包括第560、562和564位的取代。