[發明專利]一種豬乙型腦炎病毒抗體陽性血清的制備方法

有效

• 申請號: 201510907101.1
• 申請日: 2015-12-08
• 公開（公告）號: CN105548536B
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 丁旭娜;呂茂杰;楊保收;付旭彬;梁武
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙) 12219
• 代理人: 張勇

1.一種豬乙型腦炎病毒抗體陽性血清的制備方法，包括以下步驟：

1)制備豬乙型腦炎疫苗；

2)取步驟1)所述疫苗對豬瘟病毒及其抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其抗體、豬偽狂犬病毒及其抗體、豬圓環Ⅱ型病毒及其抗體均呈陰性的豬進行免疫接種；

3)從步驟2)免疫接種后的豬體內收獲血清；

其特征在于：步驟1)所述疫苗是以豬乙型腦炎病毒SA14-14-2株為抗原制備的；

同時：

步驟2)所述的豬是2～3月齡健康豬，其豬乙型腦炎HI效價不高于1:4；

步驟2)所述的免疫接種方法為：

A)基礎免疫：取步驟1)制備的豬乙型腦炎活疫苗，每次以1～5頭份的劑量注射2次，每次間隔13～17d；

B)強化免疫：基礎免疫13～17d后，取步驟1)制備的豬乙型腦炎滅活疫苗，以肌肉注射的方式接種3～5次，相鄰兩次接種的時間間隔為7～10d，后一次接種的劑量是前一次接種劑量的1.5～2倍；

步驟B)中首次注射的劑量為3～5mL。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)中所述血清的中和抗體效價高于1:400。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的疫苗包括豬乙型腦炎活疫苗，其豬乙型腦炎病毒滴度高于10^6.0TCID₅₀/頭份。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的疫苗包括豬乙型腦炎滅活疫苗，該疫苗是將豬乙型腦炎病毒液進行超濾濃縮純化后，使用β-丙內酯滅活，再使用ISA760VG佐劑進行乳化制備得到的；其中超濾濃縮的孔徑是300KD，濃縮倍數是5～10倍。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的疫苗包括豬乙型腦炎滅活疫苗，該疫苗的效價高于10^9.0TCID₅₀/ml。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的疫苗包括豬乙型腦炎滅活疫苗，該疫苗是將豬乙型腦炎病毒液進行超濾濃縮純化后，使用β-丙內酯滅活，再使用ISA760VG佐劑進行乳化制備得到的；其中滅活包括以下步驟：以1:2000～1:8000的質量比向超濾濃縮后的豬乙型腦炎病毒液中加入β-丙內酯，于2～8℃滅活24～96h，而后置于35～39℃水浴水解1.5～2.5h。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的疫苗包括豬乙型腦炎滅活疫苗，該疫苗是將豬乙型腦炎病毒液進行超濾濃縮純化后，使用β-丙內酯滅活，再使用ISA760VG佐劑進行乳化制備得到的；其中豬乙型腦炎病毒液與ISA760VG佐劑的混合比例為1:2～1:3，乳化時間5～10min。