[發明專利]一種1日齡肉雞用禽流感病毒凍干滅活疫苗制備方法

在審

• 申請號: 201510906935.0
• 申請日: 2015-12-08
• 公開（公告）號: CN105363028A
• 公開（公告）日: 2016-03-02
• 發明（設計）人: 張立霞;李亞杰;楊保收;付旭彬;梁武
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/39;A61P31/16
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 李明卓

1.一種1日齡肉雞用禽流感病毒凍干滅活疫苗制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)病毒培養；

2)病毒滅活；

3)將步驟2)滅活后的病毒液與細胞因子IFN-γ以1:1～5:1的比例混勻得到病毒混合液，使得其中細胞因子IFN-γ的含量為100～500μg/mL，而后冷凍干燥得到所述凍干滅活疫苗。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的病毒培養包括以下步驟：

A)將禽流感病毒毒種進行10倍梯度稀釋，分別取10^-8、10^-9、10^-10、10^-11稀釋度的毒種溶液接種雞胚，而后收集感染病毒的雞胚尿囊液；

B)在全部感染病毒的雞胚中選取所注射毒種溶液稀釋倍數最大的雞胚的尿囊液，即為傳代用病毒液；

C)利用步驟B)所述的傳代用病毒液，重復以上步驟A、B3～5次，取HA效價排名前10～20％的雞胚尿囊液作為種子批，將該種子批按10^-4稀釋度進行稀釋，接種雞胚，得到的尿囊液即為滅活前病毒液，用于步驟2)滅活。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟A)中用于接種雞胚的毒種溶液劑量為0.1mL。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟A)接種雞胚后，將雞胚于37℃孵育，而后收集感染病毒的雞胚尿囊液。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟A)中所述感染病毒的雞胚是接種后24～96h死亡胚或96h時未死胚。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟A)中對雞胚是否感染病毒是通過以下方法確定的：測定雞胚尿囊液的HA效價，HA效價≥(1:256)的雞胚是感染病毒的雞胚。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟C)中所述滅活前病毒液中禽流感病毒含量為10^-9.1EID₅₀/0.1mL。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟2)中病毒滅活方法為：向滅活前病毒液中加入甲醛至終濃度為0.5～2‰(v/v)，20～25℃條件下滅活12～24小時。

9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)中所述的冷凍干燥，以蔗糖脫脂乳作為凍干保護劑。

10.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)中病毒混合液與凍干保護劑的混合比例為1:0.5～1:1.5。