[發明專利]一株銅綠假單胞菌VIH2及其應用

有效

• 申請號: 201510883985.1
• 申請日: 2015-12-04
• 公開（公告）號: CN105441355B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 武俊;葛新成;魏維;李根;胡鋒;孫明明;李輝信
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01P1/00;C05F11/08;C12R1/385
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

本發明公開了一株銅綠假單胞菌VIH2及其應用，該菌株能夠通過VI型分泌系統拮抗茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)，屬于分子微生物領域，該菌株于2014年04月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，分類名為假單胞菌(Pseudomonas sp.)，保藏號CGMCC No.9075。該菌株作為革蘭氏陰性菌，體內有VI型分泌系統，它可以利用VI型分泌系統，通過接觸的方式抑制茄科勞爾氏菌的生長繁殖。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，涉及一種微生物，具體地說涉及一株銅綠假單胞菌VIH2及其在通過VI型分泌系統拮抗茄科勞爾氏菌中的應用。

背景技術

青枯病由茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起，是一種嚴重危害農作物以及水果蔬菜品質和產量的植物病害。目前對于茄科勞爾氏菌的防治主要有一農藥為主的化學防治和以產抗菌類化學物質的拮抗菌為主的生物防治。然而，施用農藥嚴重破壞土壤結構，危害人類健康；抗菌類物質是次生代謝產物，只有在特定的培養條件下才會產生，且其容易使病原菌產生抗藥性失去作用。

革蘭氏陰性菌可以利用自身的分泌系統向胞外分泌效應蛋白，與其他種屬的微生物相互作用，從而使自身獲得競爭優勢。現在越來越多的人意識到食品安全和環境保護的重要性，效應蛋白因其分泌不需要特定的培養條件且不易使病原菌產生抗藥性而被認為是一種具有潛力的控制病原菌的方式。VI型分泌系統(type VI secretion system，T6SS)是一種作用于原核生物的接觸依賴型的分泌系統，具有抑制其他種屬細菌繁殖的作用。

本實驗從南京蔬菜所番茄根際土中篩選出一株銅綠假單胞菌VIH2，通過實驗發現VIH2能夠利用體內的VI分泌系統，通過接觸的方式抑制茄科勞爾氏菌的生長。

發明內容

本發明的目的是提供一株銅綠假單胞菌VIH2，該菌能夠利用體內的VI分泌系統，通過接觸的方式抑制茄科勞爾氏菌的生長。

本發明的另一個目的是提供上述銅綠假單胞菌VIH2在防治由茄科勞爾氏菌引起的番茄青枯病中的應用。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

本發明的拮抗菌銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa VIH2)，于2014年04月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；分類名為假單胞菌(Pseudomonas sp.)，保藏號CGMCC No.9075。

所述銅綠假單胞菌VIH2菌落較小為淡黃色，表面濕潤，不透明，菌體細長且長短不一，有時呈球桿狀或線狀，成對或短鏈狀排列，不產芽孢。

所述銅綠假單胞菌VIH2的生理生化特性是：革蘭氏陰性，兼性需氧，化能異養，淀粉水解陰性，明膠水解陽性，檸檬酸鹽利用陽性。

本發明所述的銅綠假單胞菌VIH2培養時使用的主要氮源包括但不限于蛋白胨、酵母粉、硝酸鉀、硝酸銨、硫酸銨、尿素；使用的主要碳源包括但不限于蔗糖、甘露醇、麥芽糖、葡萄糖；使用的無機組分包括但不限于氯化鉀、氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、二水氯化鈣、七水合硫酸鎂、七水和硫酸亞鐵。本發明的銅綠假單胞菌VIH2發酵可在30℃，pH7.0的環境下進行。

本發明所述的銅綠假單胞菌VIH2能夠通過接觸殺死茄科勞爾氏菌，二者在NA平板上接觸培養24小時后，茄科勞爾氏菌的生物量下降5個數量級以上。如果將VIH2菌株的VI型分泌系統的調控基因ppKA破壞掉，那么，在接觸培養24小時后，茄科勞爾氏菌的生物量下降不足2個數量級。這個實驗結果證明了該銅綠假單胞菌VIH2能夠利用體內的VI分泌系統，通過接觸的方式抑制茄科勞爾氏菌的生長。