[發明專利]陸地棉轉化事件LF-ICR22及其特異性鑒定方法

有效

• 申請號: 201510880447.7
• 申請日: 2015-12-03
• 公開（公告）號: CN105368868B
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 李付廣;武芝俠;楊召恩;張雪妍;張朝軍;楊作仁;秦文強;魯麗麗;王曄;孔德培;王倩華;王玉芬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H1/02;A01H5/00;A01H6/60;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了陸地棉轉化事件LF?ICR22及其特異性鑒定方法。本發明在陸地棉CCRI24中過表達GhKCS6基因，得到轉基因棉花LF?ICR22，其為將序列表中序列1所示的外源DNA分子插入陸地棉CCRI24基因組第A09號染色體的第65694545?65696799位間，替換掉第A09號染色體的第65694545?65696799位間2253bp的堿基序列得到的棉花。通過試驗證明：轉基因棉花LF?ICR22不僅纖維的長度、馬克隆值、比強度和整齊度高于受體材料，而且株高、葉片長度、葉片寬度、葉柄長度、葉柄寬度、果枝數等也均高于受體材料，為培育具有優良纖維品質的轉基因棉花的研究奠定基礎。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及陸地棉轉化事件LF-ICR22及其特異性鑒定方法。

背景技術

轉化事件是由外源基因在基因組插入位點的上下游側翼區和外源基因構成的分子結構。通常，外源基因轉化植物可以得到一個轉化體群體，這個轉化體群體包含大量獨立的事件，其中每個事件都是獨特的。外源基因在植物中的表達受到外源基因所插入的染色體位置的影響。這可能源自染色質結構或者整合位點附近轉錄調控元件的影響。相同基因在不同轉化事件中的表達水平具有很大的差異，在表達的空間或時間模式上也可能存在差異。而且外源基因的插入也可能會影響內源基因的表達。因此，每個獨立轉化事件對受體植物的影響都是不同的。獲得能有效表達外源基因，同時不影響植株本身農藝性狀的植物轉化事件在培育轉基因作物新品種中具有重要的應用價值。

棉花作為重要的經濟作物，是紡織工業的重要原料，是國防工業重要的戰略物質，在國民經濟中發揮著作用。棉花纖維細胞是自然界中天然存在的最長的細胞，是研究細胞伸長調控機制的最佳材料；陸地棉是栽培最為廣泛的栽培種，目前全球棉花產量的95％源于陸地棉，伴隨著勞動力成本的提高，棉花機械化采摘是未來發展得必然趨勢。長度與比強度都在30以上的優質纖維棉花是生產上所必須的，但由于我國引進陸地棉的時間不足100年，長纖維陸地棉資源材料相對匱乏，導致傳統的育種方法很難在短期內產生適合生產上應用的改良的纖維品質的棉花。

前人研究表明棉纖維發育可分成四個重疊的時期分別為：纖維發育的起始期(開花前1天至開花后2-3天)、纖維伸長期(開花后3天至25天)、次生壁加厚期(開花后15天至45天)及成熟期(開花后45天至50天)。開花后15天是纖維的快速伸長期，纖維伸長速率最快可達到2mm/天。纖維的長度是纖維品質的重要指標，纖維發育的機制研究為纖維品質的改良奠定了基礎。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種轉基因棉花的培育方法。

本發明轉基因棉花的培育方法為將外源DNA片段插入目的棉花基因組第A09號染色體的第65694545-65696799位間，替換掉第A09號染色體的第65694545-65696799位間2253bp的堿基序列，得到轉基因棉花；

所述轉基因棉花的纖維品質高于所述目的棉花；

所述外源DNA片段為含有GhKCS6基因的DNA分子。

上述方法中，

所述外源DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列1；

所述外源DNA片段在所述轉基因棉花的上游側翼片段為所述目的棉花基因組第A09號染色體的自第65694545位核苷酸起向其上游方向延伸得到的長度為0至5Kb的任意一個DNA片段；

所述外源DNA片段在所述轉基因棉花的下游側翼片段為所述目的棉花基因組第A09號染色體的自第65696799位核苷酸起向其下游方向延伸得到的長度為0至5Kb的任意一個DNA片段。

上述方法中，

所述上游側翼片段為序列表中序列2所示的核苷酸；

所述下游側翼片段為序列表中序列3所示的核苷酸；