[發明專利]一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法

在審

• 申請號: 201510880349.3
• 申請日: 2015-12-03
• 公開（公告）號: CN105331619A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發明（設計）人: 曾宇;夏秀忠;張宗瓊;楊行海;農保選;李丹婷
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院水稻研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王正茂

技術領域

本發明屬于分子遺傳學技術領域，具體的說是涉及一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法。

背景技術

香稻是一種具有獨特香味的功能稻和特種稻，由于食味佳且具有顯著藥效，香稻米在我國古代就享有“貢米”之稱，其國際市場價格遠遠高于非香米，是非香米優質米的2-3倍。隨著市場需求量的增加，明確水稻香味產生的原因是發掘香味基因資源和發揮香稻優勢的有效策略，更是育種家開展優質特色水稻品種培育的首選途徑。早在90年代初，分子標記方法的應用將水稻的香味基因定位在第8染色體上，但直到2008年，才有相關研究發現水稻的香味主要受第8染色體上的Badh2基因控制，并開發了擴增香味基因Badh2整個基因序列的引物(該引物也是目前唯一已報道的可擴增Badh2基因的引物，見表1)。

利用這一研究結果，對擴增出的Badh2基因進行測序分析，目前已發現導致香稻香味產生的原因主要有四種：Badh2基因第2個外顯子的7bp缺失、第7個外顯子的8bp缺失、第4-5外顯子803bp的缺失、第13外顯子中插入3bp，并開發了相應分子標記。但由于氣候條件和地理位置的不同，我國水稻還存在很多特殊的香稻地方品種，在營養成分及微量元素的含量方面都優于其他品種，利用已開發的4種香味基因型分子標記無法檢測出其香味類型，且在加大對香稻品種研究的同時，發現利用已報道的引物根本無法擴增出這些品種的Badh2整個基因序列，阻礙了香稻新香源的挖掘，極大地影響了香稻資源的育種利用。

表1已發表的擴增整個水稻香味基因Badh2序列的引物

針對上述技術的不足，本發明為香味基因Badh2重新設計了一組引物，并通過對PCR擴增體系和擴增程序的重新摸索，最終形成了擴增香稻Badh2整個基因序列的一種新方法。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法。

本發明提供的技術方案為：

一種擴增水稻香味基因Badh2序列的方法，包括以下步驟：

(1)由如序列表SEQIDNo.1-26所示序列的特異性引物組；

(2)經過堿基的取代、缺失或添加；

(3)在PCR擴增體系中經過聚合酶鏈式反應得到水稻香味基因Badh2序列。

作為優選，所述的PCR擴增體系由KAPA2GRobustMix、Forwardprimer(10Μm)、Reverseprimer(10Μm)、TemplateDNA和ddH₂O組成。

作為優選，所述的PCR擴增體系共計25μL，其中KAPA2GRobustMix12.5μL、Forwardprimer(10Μm)1μL、Reverseprimer(10Μm)1μL、TemplateDNA1μL和ddH₂O9.5μL。

作為優選，所述的聚合酶鏈式反應的程序為94℃5min；94℃30sec，60℃30sec，72℃1min，循環35個；72℃5min；12℃forever。

本發明還提供了使用所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法擴增谷對實香糯的Badh2基因，其具有如序列表SEQIDNo.27所示的核苷酸序列。

本發明還提供了所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法在鑒定水稻香稻品種與水稻非香稻品種中的用途。

本發明還提供了所述的擴增水稻香味基因Badh2序列的方法在定向培育水稻香稻品種基因型鑒定中的用途。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

(1)本發明的方法具有簡單、快速、技術要求較低、結果鑒定準確的特點。