[發明專利]水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法

在審

• 申請號: 201510877350.0
• 申請日: 2015-12-04
• 公開（公告）號: CN106834424A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 喬保建;鄧建社;陶穎;付錫江;任代勝;陶元平
• 申請（專利權）人: 安徽袁糧水稻產業有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法，其特征在于：用自行合成的分子標記08-83引物：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2，或者用自行合成的分子標記08-84引物：SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4擴增水稻抗黑條矮縮病鑒定材料，如果用分子標記08-83引物：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2能夠擴增出286bp的擴增片段，或用分子標記08-84引物：SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4能夠擴增出183bp的擴增片段，則標志著水稻材料內存在抗黑條矮縮病位點qRBSDV12。

2.根據權利要求1所述的水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法，其特征在于包含以下步驟：

（1）以水稻黑條矮縮病抗源IR24為母本，水稻黑條矮縮病高感品種Asominori為父本，配制雜種F1，構建了包含268個單株的F2分離群體，F2單株自交獲得F2:3家系；

（2）對F2:3家系采用田間自然鑒定與改良灰飛虱排趨性鑒定組合的方法，進行水稻黑條矮縮病抗病性鑒定；

（3）親本、F1及F2:3定位群體單株的DNA采用TPS 粗提法提取；

（4）用實驗室已有的大體平均分布于水稻12條染色體的340對SSR引物（含128對自行合成引物），對親本、F1及F2:3定位群體進行PCR擴增尋找兩兩之間同時具有穩定多態性的引物，用篩選到的多態性分子標記檢測F2:3家系；

（5）根據定位群體各單株分子標記多態性檢測結果，并結合其抗性表型參數，用 Mapmaker/Exp3.0軟件進行基因和分子標記位點的遺傳連鎖分析，利用Kosambi作圖函數將交換率轉換為遺傳距離（CM）；

（6）采用基于復合區間作圖法軟件Windows QTL Cartographer V2.5檢測水稻黑條矮縮病的抗性QTL，LOD值的閾值定為2.0，按P＝0.005概率值檢測抗性QTL的數目及其在染色體上的位置；

（7）獲得水稻黑條矮縮病抗性品種IR24抗黑條矮縮病基因位點qRBSDV12，位于第8號染色體實驗室自行合成的分子標記引物08-83：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2和08-84：SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4之間，通過檢測第8號染色體上該兩個引物標記的帶型數據，可以預測該植株對水稻黑條矮縮病的抗性，大大提高抗黑條矮縮病水稻的選擇效率。

3.權利要求1所述的水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法，其特征在于所述的采用田間自然鑒定與改良灰飛虱排趨性鑒定組合的方法進行水稻黑條矮縮病抗病性鑒定的具體方案為：

（1）待鑒定材料大田小區種植，采用水育手工移栽法，每品種單本移栽60-120株，秧田期和大田移栽早期均不防治灰飛虱，其他時間按當地生產常規管理，水稻移栽活棵后調查基本苗，水稻分蘗高峰期調查每份材料水稻黑條矮縮病發病率A；

（2）將催芽后的水稻種子播于65cm×44cm×14cm的塑料周轉箱內，每份材料1行，每行10株，待幼苗長至1.5-2.0葉，按每株10頭接入3-4齡的灰飛虱若蟲，每天上午8時、下午4時調查每個單株上的蟲數，每次調查后進行驅蟲，使其盡量均勻分布，環境溫度保持在26±2℃，自然光照，5天后計算每份材料每個單株上的平均蟲數，作為排驅性測驗值，進一步按照每份材料單株平均蟲數/整個家系單株平均蟲數計算相對排趨性指數B；

（3）根據經驗計算公示計算每份材料水稻黑條矮縮病抗病指數C：C=1-A/√B，以抗病指數C作為定位群體的抗性表型參數。

4.權利要求1所述的水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法，其中所述的水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點qRBSDV12的分子標記引物選自自行合成的分子標記08-83引物：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2和自行合成的分子標記08-84引物：SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4。

5.權利要求2所述的水稻品種IR24抗黑條矮縮病位點及其分子標記方法，其中所述的對親本、F1及F2:3定位群體進行PCR擴增的PCR反應體系為：總體積為20μL，反應液組成為10×PCR buffer（200mmol/L Tris-HCl pH8.4，500mmol/L KCl，15mmol/L MgCl₂，stabilizers）2μL，10mmol/L dNTPs 1.2μL，引物各50ng，基因組DNA50ng，1.0U Taq DNA聚合酶，補水至20μL；PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性1min，48℃退火復性1min，72℃延伸50-90s，共35個循環；最后72℃保溫10min；擴增產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）銀染檢測。