[發(fā)明專利]一種畜禽糞便高效腐熟劑及其發(fā)酵方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510873042.0
• 申請(qǐng)日: 2015-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN105462878B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金雪霞;侯中躍;路懷燈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇綠科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/16;C12N1/14;C05F3/00;C05F17/00;C12R1/10;C12R1/125;C12R1/66;C12R1/23;C12R1/25
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 黃天天

1.一種畜禽糞便高效腐熟劑，其特征在于，包含如下重量份數(shù)的組分：活菌數(shù)1000億cfu/g的枯草芽孢桿菌15份，活菌數(shù)1000億cfu/g以上的地衣芽孢桿菌15份，活菌數(shù)200億cfu/g以上的釀酒酵母10份，活菌數(shù)50億cfu/g以上的黑曲霉5份，活菌數(shù)50億cfu/g以上的米曲霉5份，活菌數(shù)1000億cfu/g以上的產(chǎn)乳酸嗜酸乳桿菌15份，活菌數(shù)1000億cfu/g以上的產(chǎn)乳酸植物乳桿菌15份和麥芽糊精20份，

枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌培養(yǎng)工藝如下：各自典型營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面試管菌種，培養(yǎng)4天，選取菌落特點(diǎn)突出的菌種，然后進(jìn)行如下步驟：

(1)接實(shí)驗(yàn)室一級(jí)種子培養(yǎng)3L ：

培養(yǎng)基：酵母浸粉6g，牛肉膏15g，蛋白胨30g，葡萄糖30g，七水硫酸鎂1.5g，磷酸氫二鉀1.5g，氯化鈉15g，加入3L水，充分溶解后，用氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0，分裝至三角燒瓶，于125℃滅菌20min；

接種：滅好菌的培養(yǎng)基冷卻后，用接種環(huán)接種；

培養(yǎng)條件：搖床溫度控制在36±1℃，轉(zhuǎn)速190轉(zhuǎn)/min，培養(yǎng)18-20小時(shí)；

(2)車間二級(jí)種子罐培養(yǎng) 300L：

培養(yǎng)基：酵母粉1.5kg，玉米漿干粉6kg，葡萄糖6kg，氯化鈉1.5kg，磷酸二氫鉀150g， 磷酸氫二鉀600g；用氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0；培養(yǎng)基滅菌控制0.1mPa、120℃ 20～30分鐘；接種：火焰接種，接種量300～500ml；培養(yǎng)條件：控制罐溫36±1℃、罐壓0.06±0.01mPa，通氣量100～150L/分鐘，接種后開攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速80～120轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)16～20小時(shí)；培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：鏡檢菌體染色著色深、菌體生長(zhǎng)均勻、無(wú)雜菌，芽孢尚未形成；

(3)車間三級(jí)發(fā)酵罐培養(yǎng)3000L：

培養(yǎng)基：黃豆粉28kg，葡萄糖60kg，淀粉20kg，玉米漿干粉60kg，酵母粉15kg，蛋白胨28kg，硫酸錳1.1kg，硫酸鎂1kg，氯化鈉15kg，磷酸二氫鉀1.5kg，用氫氧化鈉調(diào)pH7.0，培養(yǎng)基滅菌控制0.1mPa、120℃ 20～30分鐘；移種：接種量150～200L；培養(yǎng)條件：控制罐溫36±1℃、罐壓0.06±0.01mPa，通氣量700-750L/min，移種后開攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速100-150轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)18-24小時(shí)；

發(fā)酵中間控制：8小時(shí)后，每2小時(shí)取樣測(cè)pH及OD值；

發(fā)酵終點(diǎn)控制：當(dāng)稀釋10倍OD值連續(xù)1.5以上，并且呈下降趨勢(shì)，pH值持續(xù)上升，取樣進(jìn)行鏡檢，鏡檢菌體染色著色不深、菌體生長(zhǎng)均勻、無(wú)雜菌，幾乎全部形成芽孢，可以終止發(fā)酵；

(4)離心機(jī)離心

將最終的發(fā)酵液打入到離心機(jī)進(jìn)行離心，得到固液混合物；

(5)噴霧干燥

混合離心充分后，經(jīng)過(guò)噴霧干燥大型設(shè)備進(jìn)行高溫噴霧，固體產(chǎn)品即為高活性、高含量的枯草芽孢桿菌或者地衣芽孢桿菌；

其中產(chǎn)乳酸嗜酸乳桿菌、產(chǎn)乳酸植物乳桿菌培養(yǎng)工藝如下：各自MRS典型斜面試管菌種，培養(yǎng)4天，選取菌落特點(diǎn)突出的菌種，然后進(jìn)行如下步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)室一級(jí)種子培養(yǎng)2.5L

培養(yǎng)基：酵母浸粉30g，牛肉膏30g，蛋白胨30g，葡萄糖60g，硫酸鎂1.5g，磷酸氫二鉀6g，乙酸鈉15g，檸檬酸銨6g；加入2.5L水，充分溶解后，用氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0，分裝至三角燒瓶，于125℃滅菌20min；

接種：滅好菌的培養(yǎng)基冷卻后，用接種環(huán)接種；

培養(yǎng)條件：生化培養(yǎng)箱溫度控制在36±1℃，靜置培養(yǎng)36-48小時(shí)；

(2)車間二級(jí)種子罐培養(yǎng) 250L

培養(yǎng)基：硫酸銨150g，硝酸鈉150g，磷酸氫二鉀600g，硫酸鎂150g，玉米漿干粉2.4kg，蛋白胨3kg，葡萄糖6kg，氯化鈉150g，檸檬酸銨600g；pH值7.0，消后體積控制在250-300L；培養(yǎng)基滅菌控制在0.1mPa、120℃ 20～30分鐘；

接種：火焰接種，接種量2-2.5L；

培養(yǎng)條件：控制罐溫36±1℃、罐壓0.06±0.01mpa，不通風(fēng)，不開攪拌，靜置培養(yǎng)24～48小時(shí)；

培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：鏡檢菌體染色著色深、菌體生長(zhǎng)均勻、無(wú)雜菌；

(3)車間三級(jí)發(fā)酵罐培養(yǎng) 2500L

培養(yǎng)基：硫酸銨1.5kg，硝酸鈉1.5kg，磷酸氫二鉀6kg，硫酸鎂1.5kg，玉米漿干粉24kg，蛋白胨30kg，葡萄糖60kg，氯化鈉1.5kg；pH值7.0，消后體積控制在2500L；培養(yǎng)基滅菌控制在0.1mPa、120℃ 20～30分鐘；

移種：接種量300～320L；

培養(yǎng)條件：控制罐溫36±1℃、罐壓0.06±0.01mpa，不通風(fēng)，不開攪拌，靜置培養(yǎng)24～48小時(shí)；

發(fā)酵中間控制：16小時(shí)后，每2小時(shí)取樣測(cè)pH及OD值；

發(fā)酵終點(diǎn)控制：當(dāng)稀釋10倍OD值連續(xù)0.3以上，并且呈下降趨勢(shì)，pH值3.5以下，并且呈上升趨勢(shì)，取樣進(jìn)行鏡檢，鏡檢菌體染色著色不深、菌體生長(zhǎng)均勻、無(wú)雜菌，可以終止發(fā)酵；

(4)離心機(jī)離心

將最終的發(fā)酵液打入到管式離心機(jī)進(jìn)行離心，得到固液混合物；

(5)冷凍干燥

混合離心充分后，經(jīng)過(guò)冷凍干燥設(shè)備進(jìn)行低溫冷凍干燥，固體產(chǎn)品即為嗜酸乳桿菌或者植物乳桿菌。