[發(fā)明專利]一種與他莫昔芬耐藥性相關(guān)的microRNA分子MiR-141及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510870873.2
• 申請(qǐng)日: 2015-12-01
• 公開（公告）號(hào): CN105441449A
• 公開（公告）日: 2016-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張健;張媛;李夢(mèng)陽;陳蘇寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 王霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤生物治療領(lǐng)域，涉及一種與他莫昔芬耐藥性相關(guān)的microRNA分子MiR-141及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其高發(fā)病率嚴(yán)重威脅著女性的身體健康。目前，以他莫昔芬為基礎(chǔ)的內(nèi)分泌療法對(duì)雌性激素受體(ER)陽性乳腺癌患者的療效具有重要意義。

他莫昔芬是目前ER陽性乳腺癌治療的臨床一線用藥，該藥為雌二醇競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，通過與雌二醇競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合雌激素受體，減弱雌激素受體介導(dǎo)的腫瘤增殖轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而達(dá)到治療腫瘤的作用。但在肯定治療效果的同時(shí)，不得不承認(rèn)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象是ER陽性乳腺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要原因，他莫昔芬出現(xiàn)的耐藥現(xiàn)象是限制其臨床療效的主要原因。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種與他莫昔芬耐藥性相關(guān)的microRNA分子MiR-141及其應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明公開了一種與他莫昔芬耐藥性相關(guān)的microRNA分子MiR-141，MiR-141的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

本發(fā)明還公開了上述的microRNA分子MiR-141作為乳腺癌他莫昔芬耐藥標(biāo)志物的應(yīng)用。

所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受體陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥細(xì)胞中低表達(dá)。

所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受體陽性乳腺癌他莫昔芬敏感細(xì)胞中高表達(dá)。

本發(fā)明還公開了上述的microRNA分子MiR-141在制備針對(duì)乳腺癌他莫昔芬耐藥的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開了上述的microRNA分子MiR-141作為設(shè)計(jì)抗乳腺癌他莫昔芬耐藥的藥物靶點(diǎn)的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

本發(fā)明公開了一種與他莫昔芬耐藥性相關(guān)的microRNA分子，為MiR-141，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。MiR-141具有在ER陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥細(xì)胞中低表達(dá)、在ER陽性乳腺癌他莫昔芬敏感細(xì)胞中高表達(dá)的特性，是一種新的乳腺癌他莫昔芬耐藥標(biāo)志物。因此，本發(fā)明為設(shè)計(jì)抗乳腺癌他莫昔芬耐藥藥物提供了新的靶點(diǎn)，并以此為依據(jù)，用以設(shè)計(jì)和開發(fā)直接針對(duì)乳腺癌他莫昔芬耐藥的新藥。本發(fā)明公開的MiR-141具有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞耐藥的生物學(xué)功能及作用機(jī)制，為有效逆轉(zhuǎn)乳腺癌他莫昔芬耐藥及提高乳腺癌的臨床化療效果提供有效途徑。

附圖說明

圖1為構(gòu)建MCF-7他莫昔芬耐藥細(xì)胞系(MCF-7/TR)，通過細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCF-7/TR對(duì)他莫昔芬的耐藥能力。

圖2為Real-timePCR檢測(cè)MCF-7/TR及MCF-7親本細(xì)胞中MiR-141的表達(dá)水平。

圖3為細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染MiR-141后構(gòu)建的MCF-7/TR細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的耐藥能力。

圖4為細(xì)胞增殖-毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染MiR-141antagomiR后乳腺癌MCF-7親本細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的耐藥能力。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。

他莫昔芬在乳腺癌的治療過程中發(fā)揮著重要作用，但出現(xiàn)的耐藥現(xiàn)象是限制其臨床療效的主要原因。明確新的microRNA在乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的生物學(xué)功能和機(jī)制為有效提高乳腺癌的臨床療效提供新的生物靶標(biāo)選擇。

本發(fā)明公開了一種腫瘤耐藥microRNA分子，為MiR-141，其核苷酸序列為UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG。

本發(fā)明還公開了MiR-141作為設(shè)計(jì)抗乳腺癌他莫昔芬耐藥藥物靶點(diǎn)的用途，以及MiR-141在乳腺癌他莫昔芬耐藥性的臨床診斷中的應(yīng)用，以及根據(jù)這一靶點(diǎn)設(shè)計(jì)出的藥物。

1、構(gòu)建MCF-7他莫昔芬耐藥細(xì)胞系(MCF-7/TR)

采用高濃度短時(shí)間他莫昔芬沖擊法誘導(dǎo)MCF-7/TR耐藥細(xì)胞株。取對(duì)數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞約10^7個(gè)，接種于直徑為10cm的培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后加入終濃度為10μmol/L的他莫昔芬，2～3天換液1次，每次換液后加入等濃度的他莫昔芬。經(jīng)過2月的培養(yǎng)后，通過有限稀釋法獲得單克隆的乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐藥細(xì)胞，并在7d無藥物干預(yù)下擴(kuò)增細(xì)胞。為了維持MCF-7/TR耐藥細(xì)胞株的耐藥性，細(xì)胞長期在終濃度為2μmol/L的他莫昔芬的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

2、檢測(cè)MCF-7親本細(xì)胞及MCF-7/TR細(xì)胞中miR-141的表達(dá)量