[發明專利]一種與他莫昔芬耐藥性相關的microRNA分子MiR-200a及其應用

在審

• 申請號: 201510869409.1
• 申請日: 2015-12-01
• 公開（公告）號: CN105400785A
• 公開（公告）日: 2016-03-16
• 發明（設計）人: 張健;李夢陽;張媛;陳蘇寧
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 王霞

技術領域

本發明屬于腫瘤生物治療領域，涉及一種與他莫昔芬耐藥性相關的microRNA分子MiR-200a及其應用。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其高發病率嚴重威脅著女性的身體健康。目前，以他莫昔芬為基礎的內分泌療法對雌性激素受體(ER)陽性乳腺癌患者的療效具有重要意義。

他莫昔芬是目前ER陽性乳腺癌治療的臨床一線用藥，該藥為雌二醇競爭性拮抗劑，通過與雌二醇競爭性結合雌激素受體，減弱雌激素受體介導的腫瘤增殖轉移相關的信號轉導，從而達到治療腫瘤的作用。但在肯定治療效果的同時，不得不承認腫瘤細胞產生耐藥現象是ER陽性乳腺癌轉移和復發的重要原因，他莫昔芬出現的耐藥現象是限制其臨床療效的主要原因。

發明內容

本發明的目的在于提供一種與他莫昔芬耐藥性相關的microRNA分子MiR-200a及其應用。

本發明是通過以下技術方案來實現：

本發明公開了一種與他莫昔芬耐藥性相關的microRNA分子MiR-200a，MiR-200a的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

本發明還公開了上述的microRNA分子MiR-200a作為乳腺癌他莫昔芬耐藥標志物的應用。

所述的microRNA分子MiR-200a在雌性激素受體陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥細胞中低表達。

所述的microRNA分子MiR-200a在雌性激素受體陽性乳腺癌他莫昔芬敏感細胞中高表達。

本發明還公開了上述的microRNA分子MiR-200a在制備針對乳腺癌他莫昔芬耐藥的藥物中的應用。

本發明還公開了上述的microRNA分子MiR-200a作為設計抗乳腺癌他莫昔芬耐藥的藥物靶點的應用。

與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果：

本發明公開了一種與他莫昔芬耐藥性相關的microRNA分子，為MiR-200a，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。MiR-200a具有在ER陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥細胞中低表達、在ER陽性乳腺癌他莫昔芬敏感細胞中高表達的特性，是一種新的乳腺癌他莫昔芬耐藥標志物。因此，本發明為設計抗乳腺癌他莫昔芬耐藥的藥物提供了新的靶點，并以此為依據，用以設計和開發直接針對乳腺癌他莫昔芬耐藥的新藥。本發明公開的MiR-200a具有促進乳腺癌細胞耐藥的生物學功能及作用機制，為有效逆轉乳腺癌他莫昔芬耐藥及提高乳腺癌的臨床化療效果提供有效途徑。

附圖說明

圖1為構建MCF-7他莫昔芬耐藥細胞系(MCF-7/TR)，通過細胞增殖-毒性實驗檢測MCF-7/TR對他莫昔芬的耐藥能力。

圖2為Real-timePCR檢測MCF-7/TR及MCF-7親本細胞中MiR-200a的表達水平。

圖3為細胞增殖-毒性實驗檢測轉染MiR-200a后構建的MCF-7/TR細胞對他莫昔芬的耐藥能力。

圖4為細胞增殖-毒性實驗檢測轉染MiR-200aantagomiR后乳腺癌MCF-7親本細胞對他莫昔芬的耐藥能力。

具體實施方式

下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。

他莫昔芬在乳腺癌的治療過程中發揮著重要作用，但出現的耐藥現象是限制其臨床療效的主要原因。明確新的microRNA在乳腺癌細胞他莫昔芬耐藥中的生物學功能和機制為有效提高乳腺癌的臨床療效提供新的生物靶標選擇。

本發明公開了一種腫瘤耐藥microRNA分子，為MiR-200a，其核苷酸序列為CAUCUUACCGGACAGUGCUGGA。

本發明還公開了MiR-200a作為設計抗乳腺癌他莫昔芬耐藥藥物靶點的用途，以及MiR-200a在乳腺癌他莫昔芬耐藥性的臨床診斷中的應用，以及根據這一靶點設計出的藥物。

1、構建MCF-7他莫昔芬耐藥細胞系(MCF-7/TR)

采用高濃度短時間他莫昔芬沖擊法誘導MCF-7/TR耐藥細胞株。取對數生長期的MCF-7細胞約個10^7，接種于直徑為10cm的培養皿中，待細胞生長穩定后加入終濃度為10μmol/L的他莫昔芬，2-3天換液1次，每次換液后加入等濃度的他莫昔芬。經過2月的培養后，通過有限稀釋法獲得單克隆的乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐藥細胞，并在7d無藥物干預下擴增細胞。為了維持MCF-7/TR耐藥細胞株的耐藥性，細胞長期在終濃度為2μmol/L的他莫昔芬的培養液中培養。