[發明專利]一種人外周血循環腫瘤DNA中septin 9基因甲基化的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510864133.8
• 申請日: 2015-12-01
• 公開（公告）號: CN105331727B
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發明（設計）人: 賀毅憬;劉楊;彭艷;肖飛;虞健;涂超峰
• 申請（專利權）人: 湖南宏雅基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏;周棟

本發明公開了一種人外周血循環腫瘤DNA中septin 9基因甲基化的檢測試劑盒，其中包括：septin9基因目的位點的甲基化特異引物；septin9基因目的位點的非甲基化特異的雙脫氧胞苷修飾引物；septin9基因特異的水解探針；內參基因的引物和內參基因的水解探針；所述septin9基因目的位點為septin9基因V2轉錄本γ1外顯子區所包含的至少一個CpG位點；所述內參基因為GAPDH、β?actin、B2M、SDHA、HPRT1中的一種或者多種。本發明所述試劑盒的組份設置及其結果判讀方案使得檢測過程簡便，可操作性強。檢測結果可靠、特異性好。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種人外周血循環腫瘤DNA中septin 9基因甲基化的檢測試劑盒。

背景技術

結直腸癌是在世界范圍內導致人類死亡的重大疾病之一。在歐洲和美國的癌癥新發病中結直腸癌分別排在第二和第三，歐洲2012年結直腸癌新發病例約為447000人，死亡病例約為215000人，美國2013年新發病例約為142820人，死亡病例約為50830人.而在中國，結直腸癌在2012年的新發病例約為400000人，已成為中國人發病率及死亡率第三高的疾病。

通過常規篩查可實現結直腸癌的早期檢測，進而進行早期治療來阻止病程進展甚至治愈。但現狀是60％-70％的結直腸癌患者是在中期或者晚期才被診斷發現，只有接近40％的患者是在早期被發現的。來自USPSTF(US Preventive Services Task Forceodic)的數據顯示通過定期的篩查可避免近60％因結直腸癌導致的死亡，且結直腸癌患者的5年生存率也將由46％提升至73％。因此一種有效的結直腸癌早期篩查方法將提高患者的5年生存率，降低死亡率。

目前主要有便潛血實驗(FOBT[愈創木脂法(gFOBT)和免疫化學法(iFOBT)])、結直腸鏡兩種結直腸癌篩查方法。作為一種常規的篩查方法，愈創木脂法便潛血實驗(gFOBT)會因飲食，藥物和其他因素的影響而導致假陽性，因而影響檢測的穩定性。免疫化學法便潛血實驗(iFOBT)在敏感性和特異性上比傳統的愈創木脂法便潛血實驗(gFOBT)表現要優越，但大多數臨床實驗室進行的iFOBT還是定性的而且如果樣本從搜集到檢測之間超過5天，其檢出率將大大降低。相比之下，結直腸鏡是一種侵入式的檢測并且在檢測前需要相應的腸道準備以確保大腸腔內滿意的視野。其還有可能引起如消化道出血、腸穿孔和感染等并發癥。而且患有嚴重心臟病、心肺功能障礙、急性腹瀉、嚴重潰瘍性結腸炎、克羅恩病、腹膜炎等疾病的患者及孕婦不能進行結直腸鏡檢查。因此不論是便潛血實驗或是結直腸鏡都存在患者依從性不好的問題。在美國便潛血實驗的篩查率僅為10％，2008年50歲以上人群結直腸鏡篩查率為50.2％。而在中國，便潛血實驗和結直腸鏡的篩查率分別預計不足5％和3％。由于傳統發的結直腸癌篩查方法存在低效性或侵入性，所以現急需一種更加方便，更加精確的篩查方法來提高結直腸癌的篩查率。

最近，基于血液的結直腸癌檢測-SEPT9基因甲基化檢測有望應用于臨床篩查。多個臨床試驗發現甲基化的SEPT9基因是結直腸癌早期檢測的特異的生物標記。在結直腸癌早期，SEPT9基因被超甲基化，其DNA被壞死或凋亡的腫瘤細胞釋放到外周血中。可通過檢測受檢者的外周血中SEPT9基因甲基化的程度來判斷其患結直腸癌的風險。循環DNA被發現于人類外周血清中，且其在風濕、腫瘤等多種疾病中的含量會急劇增加。甲基化的DNA同樣也被發現存在于人類血清中。Lofton-Day及其同事在結直腸癌患者和健康對照人群的血樣中測試了3個DNA甲基化生物標記。SEPT9被證明是特異性最好的候選標記。隨后，多個病例對照研究證實了SEPT9可作為結直腸癌檢測的甲基化生物標記。在這些病例對照研究中SEPT9檢測的敏感性和特異性分別為67-79.3％和86-99％。這些研究證明了SEPT9檢測是一種精確，合適，快速以及微創的結直腸癌檢測方法。