[發(fā)明專利]一種煙草基因NtTCTP及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510858859.0
• 申請日: 2015-12-01
• 公開（公告）號: CN105586346B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭玉雙;張勁松;陳受宜;賈蒙驁;任學(xué)良;趙杰宏
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州省煙草科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415
• 代理公司: 貴陽中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 吳無懼

本發(fā)明公開了一種煙草基因NtTCTP，其特征在于：具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；其編碼的蛋白質(zhì)，具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，該基因用于調(diào)節(jié)煙草對PVY的抗性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種煙草基因NtTCTP及其用途，屬于植物基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

翻 譯 控 制 腫 瘤 蛋 白（Translationally controlled tumor protein，TCTP），也稱 p21 或 p23，是真核生物中遍在表達(dá)和分布的一種蛋白。其最早發(fā)現(xiàn)于哺乳動物腫瘤細(xì)胞中，并在轉(zhuǎn)錄后水平受到調(diào)控。

多種生物中的大量研究發(fā)現(xiàn) TCTP 參與多種細(xì)胞學(xué)過程，如促進(jìn)組胺釋放，細(xì)胞凋亡，微管組裝、離子平衡等，并與一系列蛋白，如 polo 激酶、tubulin、actin 和鈉鉀 ATP酶等有相互作用。動物中 TCTP 參與細(xì)胞生長分化，惡性轉(zhuǎn)化，抗逆以及細(xì)胞凋亡等。敲除TCTP基因后的老鼠，由于缺少細(xì)胞分化和過度細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致老鼠出現(xiàn)胚胎致死現(xiàn)象。果蠅中，某一特異器官中TCTP表達(dá)被中斷后，該器官細(xì)胞數(shù)目下降和細(xì)胞生長出現(xiàn)缺陷最終導(dǎo)致該器官變小。植物中TCTP mRNA 表達(dá)與有絲分裂密切相關(guān)，黑暗可以誘導(dǎo)牽牛中TCTPmRNA 積累。另外，TCTP 蛋白在調(diào)節(jié)韌皮部蛋白的長距離運(yùn)輸和花粉管生長的過程中發(fā)揮著重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥中，TCTP 作為有絲分裂生長的正調(diào)控因子，能夠特異調(diào)控細(xì)胞周期的時間。TCTP 通過 TOR（Target of rapamycin）生長調(diào)控途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞分化。卷心菜中的研究發(fā)現(xiàn)，TCTP 不僅調(diào)控生長發(fā)育，同時受外界環(huán)境誘導(dǎo)。這些已有研究表明，TCTP 不僅能夠調(diào)控有機(jī)體生長發(fā)育，而且具有植物專屬功能，因此，研究該類基因?qū)VY的抗性研究，具有重要意義。

挖掘植物基因組中抗馬鈴薯Y病毒（potato virus Y,PVY），是植物抗病毒育種的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種煙草基因NtTCTP以及該基因編碼的蛋白質(zhì)，該基因的活性與煙草抗PVY的抗性密切相關(guān)。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種煙草基因NtTCTP，具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

一種煙草基因NtTCTP編碼的蛋白質(zhì)，具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

一種煙草基因NtTCTP用于調(diào)節(jié)煙草對PVY的抗性。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供一個煙草翻譯控制腫瘤蛋白基因，命名為NtTCTP，該基因全長507bp，編碼一個含168個氨基酸的蛋白，并研究了該基因在煙草抗PVY過程中的作用。在栽培煙草中沉默該基因，煙草表現(xiàn)出對PVY更強(qiáng)的抗性，可達(dá)到免疫水平，在栽培煙草中超量表達(dá)該基因，煙草對PVY更敏感。說明該基因在煙草抗PVY過程中具有重要作用，可用于煙草等植物抗PVY育種。

首先克隆得到煙草中翻譯控制腫瘤蛋白基因NtTCTP，并構(gòu)建該基因的RNAi表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)對煙草進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明，該基因在煙草中沉默后，提高煙草對PVY的抗性，抗性可提高50%-80%。

附圖說明

圖1為不同株系中TCTP基因的western 雜交驗證；

圖2為TCTP超量表達(dá)株系O2、O7；TCTP沉默株系Ri16、Ri20和野生煙草WT的葉片性狀圖。

具體實(shí)施方式

一、材料與方法

1.實(shí)驗材料