[發明專利]大豆種子和油的組成以及產生所述種子的方法

有效

• 申請號: 201510857766.6
• 申請日: 2007-03-09
• 公開（公告）號: CN105475117B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: J·J·菲拉提;G·E·基斯利;T·沃克;T·烏爾瑪索夫
• 申請（專利權）人: 孟山都技術有限公司
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/06;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

1.產生大豆植物的方法，所述大豆植物包含按重量計算占總種子脂肪酸含量的低于6％的亞麻酸含量、按重量計算占總種子脂肪酸含量的7％或更少的飽和脂肪酸含量和占總種子脂肪酸含量的55％至78％的油酸含量，該方法包括步驟：

a)產生一種或多種大豆植物，具有：

(i)由以下組成的轉基因：可操作地與3'端的長度減少至少100個連續核苷酸的SEQ IDNO:1序列的有義和反義大豆FAD2-1內含子#1連接的啟動子；SEQ ID NO:28的有義和反義FATB-1 5'未翻譯區(UTR)編碼序列的長度為至少42個核苷酸的片段；SEQ ID NO:28的FATB-1葉綠體轉運肽(CTP)編碼區的有義和反義序列的長度為至少40個核苷酸的片段；和降低內源性大豆FAD2-1和FATB-1基因的表達的3’終止或多腺苷酸化區；可操作地與賦予草甘膦抗性的啟動子和3’終止或多腺苷酸化區連接的選擇性的CP4EPSPS基因；和農桿菌T-DNA邊界元件；和

(ii)SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62的內源性大豆FAD3基因中的至少一個功能損失性的突變；

b)獲得至少一粒來自步驟(a)中獲得的所述大豆植物的種子；

c)對于步驟(b)的所述種子，確定按重量計算的亞麻酸、飽和脂肪酸和油酸占總種子脂肪酸含量的百分數；和

d)鑒定產生具有如下種子脂肪酸組成的種子的大豆植物，所述種子脂肪酸組成包含按重量計算占總種子脂肪酸含量的低于6％的亞麻酸含量、按重量計算占總種子脂肪酸含量的7％或更少的飽和脂肪酸含量和占總種子脂肪酸含量的55％至78％的油酸含量。

2.權利要求1的方法，其中步驟(a)中產生的所述大豆植物包含SEQ ID NO:61的內源性大豆FAD3基因中的功能損失性突變和SEQ ID NO:62的內源性大豆FAD3基因中的功能損失性突變。

3.權利要求2的方法，其中通過來自3'端的100個連續核苷酸縮短所述大豆FAD2-1內含子#1。

4.權利要求3的方法，其中步驟(d)中鑒定的所述大豆植物產生包含按重量計算低于3％的總種子脂肪酸的亞麻酸含量、按重量計算6％或更少的總種子脂肪酸的飽和脂肪酸含量和按重量計算55％至78％的總種子脂肪酸的油酸含量的種子。

5.權利要求1的方法，其中所述大豆植物在步驟(a)中通過以下產生：

i’)將包含權利要求1的步驟(a)(i)所示的所述轉基因的第一大豆植物親本品系與包含SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62的內源性大豆FAD3基因中的至少一個功能損失性突變的第二大豆親本品系雜交，以獲得對于所述轉基因是雜合的且對于FAD3基因中的至少一個功能損失性突變是雜合的F1大豆植物；和

ii’)使來自(i’)的F1后代植物自交以獲得對于所述轉基因是純合的且對于FAD3基因中的所述功能損失性突變是純合的F2大豆植物，從而獲得包含所述減少內源性大豆FAD2-1基因和內源性FATB-1基因兩者的表達的轉基因和內源性大豆FAD3基因中的所述功能損失性突變的大豆植物；從而產生步驟(a)的所述大豆植物。

6.權利要求5的方法，其中在步驟(i’)中通過將多個F1植物經歷至少一種DNA分析技術來獲得對于轉基因是雜合的且對于FAD3基因中的至少一個功能損失性突變是雜合的所述F1大豆植物，所述DNA分析技術允許鑒定對于所述轉基因是雜合的且對于FAD3基因中的至少一個功能損失性突變是雜合的F1植物。

7.權利要求5的方法，其中在步驟(ii’)中通過將多個F2植物經歷至少一種DNA分析技術來獲得對于所述轉基因是純合的且對于FAD3基因中的至少一個功能損失性突變是純合的所述F2大豆植物，所述DNA分析技術允許鑒定對于所述轉基因是純合的且對于FAD3基因中的至少一個功能損失性突變是純合的F2植物。