[發明專利]可用于檢測與喉癌相關的ESRRG基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201510851493.4
• 申請日: 2015-11-30
• 公開（公告）號: CN105385758B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 沈志森;周重昌
• 申請（專利權）人: 寧波市醫療中心李惠利醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

本發明公開了可用于檢測與喉癌相關的ESRRG基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用，特點是該試劑盒包括一對ESRRG基因啟動子區甲基化特異性擴增引物及一個甲基化特異性測序引物，其中上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，甲基化特異性測序引物如SEQ ID NO.3所示，優點是該診斷試劑盒可以方便快捷地在分子水平上實現對喉癌的檢測，檢測效率高，針對性強，同時，以ESRRG基因啟動子區甲基化為靶點的藥物有望成為喉癌輔助診斷、檢測和篩選的一種新手段。

技術領域

本發明涉及一種輔助診斷喉癌的檢測試劑盒，尤其是涉及一種可用于檢測與喉癌相關的ESRRG基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用。

背景技術

喉癌(Laryngeal carcinoma，LC)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其發病率在我國北方地區位于頭頸部惡性腫瘤的第一位，在我國南方地區，僅次于鼻咽癌居于第二位：在世界范圍內，居于全身惡性腫瘤的第十一位，約占全球每年新發惡性腫瘤的1-2.5%，其中喉鱗狀細胞癌約占90％。目前研究表明喉癌的發生發展與生活習慣、環境因素、遺傳和表觀遺傳學等多種復雜的因素相關。近年來，隨著人們生活水平的提高，環境因素惡化等影響，我國喉癌的發病率和死亡率增長迅速，而且發病年齡明顯提前。由于喉癌的早期癥狀不明顯，病理學活檢是其診斷的金標準，確診時患者多數已進入中、晚期，許多患者在疾病發生的早期沒有得到及時的診斷和治療，對喉癌的治療和預后帶來了極差的影響。盡管近幾十年來外科技術和輔助治療得到不同程度的提高，但是目前喉癌的五年生存率仍未明顯增長，原因之一就是目前喉癌發病的分子學機制仍不清楚，早期診斷及治療不理想。因此，有必要探索具有高敏感性和特異性的分子檢測指標，對喉癌患者做到早發現，早診斷，早治療，提高喉癌患者總體生存率。

雌激素相關受體伽馬（estrogen-related receptor gamma，ESRRG) 是雌激素相關受體( Estrogen-related receptors，ERRs) 家族中的一員，定位于染色體1q41（chr1:216676588-217311097），cDNA 全長3.0kb，編碼一條長458 氨基酸多肽鏈。因其尚未發現天然配體，故也稱為孤核受體。雌激素相關受體可通過兩個鋅指結構組成的DNA 結合域，和其它轉錄因子之間相互作用或結合DNA 序列上的反應元件，調控多種基因的轉錄，參與細胞增殖、分化、凋亡、胞內信號傳導、核內信號信息的交流等過程。最近國內外的一些研究表明，通過上調雌激素相關受體伽馬的表達可增加E-鈣黏蛋白表達，繼而促進間質向上皮轉化，并在體內抑制乳腺癌的生長。同樣，將雌激素相關受體伽馬基因前體進轉染入前列腺癌細胞系LnCaP 和DU145，可在體外顯著抑制腫瘤增殖和在體內抑制腫瘤形成，表明雌激素相關受體伽馬（estrogen-related receptor gamma，ESRRG)在多種腫瘤中起到抑癌基因的作用。但是目前，國內外還沒有公開任何關于在喉癌中用于檢測雌激素相關受體伽馬基因啟動子區甲基化程度的檢測試劑盒相關研究報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測方便、針對性強、檢測準確率高的可用于檢測與喉癌相關的ESRRG基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用，其中基因ESRRG甲基化水平與喉癌的患病率呈正相關，可通過對樣品DNA甲基化水平測定輔助診斷喉癌。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種可用于檢測與喉癌相關的ESRRG基因啟動子區甲基化程度的試劑盒，包括ESRRG基因啟動子區的甲基化特異性擴增上游引物、下游引物及其甲基化特異性測序引物，其中所述的甲基化特異性擴增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：