[發明專利]綿羊季節性繁殖性狀相關的分子標記、引物對、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請號: 201510845137.1
• 申請日: 2015-11-27
• 公開（公告）號: CN105462967B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 沈敏;高磊;趙賡;甘尚權;楊井泉;竇立靜;何高明
• 申請（專利權）人: 新疆農墾科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒;劉鐵生

1.綿羊季節性繁殖性狀相關的分子標記，其為SEQ ID No.1的第113位所示的G/C堿基突變。

2.用于鑒別綿羊是否為常年發情綿羊的分子標記的引物對，由正向引物和反向引物組成，其中所述正向引物為與SEQ ID No.1的第113位上游特異結合的單鏈DNA，所述反向引物為與SEQ ID No.1的第113位下游特異結合的單鏈DNA，所述的分子標記為權利要求1所述。

3.根據權利要求2所述的引物對，其特征在于，所述正向引物的序列為5’-TCCTCATCGCCTCCGTAGAC-3’，是SEQ ID No.1的第1-20位；所述反向引物為與SEQ ID No.1的第213-230位反向互補的單鏈DNA，其序列是5’-CCCCAGCATGATGACGTAG-3’。

4.根據權利要求2所述的引物對，其特征在于，所述SEQ ID No.1的第113位上游不包括SEQ ID No.1的第113位，所述SEQ ID No.1的第113位下游不包括SEQ ID No.1的第113位。

5.鑒別綿羊是否為常年發情綿羊的試劑盒，所述試劑盒包括上游引物和下游引物組成的引物對，其特征在于，所述引物對為權利要求2所述的引物對。

6.根據權利要求5所述的引物對，其特征在于，所述試劑盒為PCR試劑盒。

7.鑒別非季節性繁殖綿羊的方法，包括如下步驟：以待鑒別綿羊的基因組DNA為模板，采用權利要求2所述的引物對進行擴增，根據得到的擴增產物按照下述方法確定所述待鑒別綿羊是否為常年發情綿羊：

所述待鑒別綿羊的擴增產物在SEQ ID No.1的113位的堿基為G，所述待鑒別綿羊為常年發情綿羊或為候選常年發情綿羊；所述待鑒別綿羊的擴增產物在SEQ ID No.1的113位的堿基為C，所述待鑒別綿羊為季節性發情綿羊或為候選季節性發情綿羊。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述擴增為PCR擴增。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增采用的引物退火溫度均為60℃。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增中采用的PCR反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環；72℃延伸10min；20℃保存。

11.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述待鑒別綿羊為阿勒泰羊、中國美利奴或湖羊。

12.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測PCR擴增產物的單鏈構象多態性，按照下述方法確定所述待鑒定綿羊是否為常年發情綿羊：

所述待鑒定綿羊的PCR產物在12％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為兩條帶，則所述待鑒定綿羊為雜合子，即GC型；

所述待鑒定綿羊的PCR產物在12％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為一條帶，且該條帶對應雜合子所呈現兩條帶中靠近加樣孔的一條帶的位置，則所述待鑒定綿羊為常年發情綿羊或候選常年發情綿羊，即GG型；

所述待鑒定綿羊的PCR產物在12％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為一條帶，且該條帶對應雜合子所呈現兩條帶中距離加樣孔較遠的一條帶的位置，則所述待鑒定綿羊為季節性發情綿羊或候選季節性發情綿羊，即CC型。