[發明專利]一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法

在審

• 申請號: 201510844348.3
• 申請日: 2015-11-30
• 公開（公告）號: CN105409770A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 謝再法;姚鳳鳴;郭鋒燕
• 申請（專利權）人: 浙江拓普藥業股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發明涉及一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，屬于生物領域。

背景技術

桔梗屬桔梗科桔梗屬多年生直立草本植物，別名鈴鐺花、包袱花、道拉基（朝鮮語）等。近代藥理及臨床醫學研究表明，桔梗根有祛痰、鎮咳、抗炎、降血壓、降血糖、抗膽堿、抗過敏、抗腫瘤及提高免疫力等廣泛的藥理活性。

桔梗是兩性花，在自然狀態下自交結實率低，主要靠異花授粉。所以現在自然界中生長的桔梗群體的遺傳基礎是高度雜合的群體，這給桔梗的遺傳研究和育種實踐帶來很多困難。通過花藥培養或未授精的胚珠培養得到單倍體植株，再經染色體加倍得到純系，已在很多植物中獲得成功。單倍體植株經染色體加倍后，在一個世代中即可出現純合的二倍體，從中選出的優良純合系后代不分離，表現整齊一致，可縮短育種年限。

所以，誘導花藥生成愈傷組織的培養基及分化成苗的分化培養基即成為關鍵。

本發明旨在提供一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，其利用多種獨特中草藥提取物，成本低廉，可以快速高效對桔梗花藥愈傷組織進行誘導，而且誘導率高，誘導時間短，存活率也很高。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明針對背景技術存在的問題，提供一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，其利用多種獨特中草藥提取物，成本低廉，可以快速高效對桔梗花藥愈傷組織進行誘導，而且誘導率高，誘導時間短，存活率也很高。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，其特征在于，步驟如下：

（1）預處理：

取多年生“三成紫花”處于單核靠邊期的花藥；取花蕾放在5℃冰箱下處理30min，然后放在15℃下處理30min；

（2）誘導培養：

接種前用流水沖洗3min,在無菌條件下取花蕾投入75%的酒精浸泡30s,再放入0.1%的汞中消毒15min,用無菌水沖洗6次，然后剝取花藥，一分為二，接種于誘導愈傷組織的培養基上,置于24-26℃培養室進行暗培養，誘導階段均為暗培養，時間為15d；

所述誘導愈傷組織的培養基為以MS為基礎培養基，蔗糖16.5g/L、瓊脂3.5g/L，復方中藥提取液0.3g/L、6-BA1.0mg/L、pH6.5；

所述復方中藥提取液的制備方法為：

如下所述均為質量份；

取8-10份黃芪，1-2份天山雪蓮，2份黨參，1份益母草，1份茯苓，0.8-1.0份山楂葉，上述藥物按傳統煎煮方法加300份煎煮至30份水時，將藥液過濾，分裝并3℃保存；

（3）分化培養：

分化培養基為：以MS為基礎培養基，蔗糖12.8g/L、瓊脂3.5g/L、6-BA1.0mg/L、NAA0.6mg/L為分化培養基，分化培養2周。

本發明首次將中草藥萃取液用于桔梗花藥愈傷組織的誘導，其效果好，成本低：誘導率高達99.8%以上，接種到分化培養基后，分化率為78.9-99.3%。

中草藥的配伍既可選擇單味藥，也可選擇多味藥組成的復方，但不是一些藥物的簡單粗制組合，無“法”無“方”無“配伍”，在理論聯系實踐基礎上，考慮到現代藥物本身的性能有選擇地將藥物配伍起來使用，充分發揮藥物的整體作用。

本發明在傳統中草藥理論的基礎上，一種桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，其利用多種獨特中草藥提取物，成本低廉，可以快速高效對桔梗花藥愈傷組織進行誘導，而且誘導率高，誘導時間短，存活率也很高。

本發明的有益之處在于：

（1）本發明利用多種獨特中草藥提取物，成本低廉，可以快速得到愈傷組織，且長勢良好，分化率高，具體而言是99.8%以上。

（2）接種到分化培養基后，分化率為78.9-99.3%,然后煉苗、田間移栽、成活率達98％以上。

具體實施方式

實施例1：

桔梗花藥愈傷組織的誘導方法，其特征在于，步驟如下：

（1）預處理：

取多年生“三成紫花”處于單核靠邊期的花藥；取花蕾放在5℃冰箱下處理30min，然后放在15℃下處理30min；

（2）誘導培養：

接種前用流水沖洗3min,在無菌條件下取花蕾投入75%的酒精浸泡30s,再放入0.1%的汞中消毒15min,用無菌水沖洗6次，然后剝取花藥，一分為二，接種于誘導愈傷組織的培養基上,置于24℃培養室進行暗培養，誘導階段均為暗培養，時間為15d；