[發(fā)明專利]一種同時檢測對蝦HPV、MBV和IHHNV的多重PCR檢測引物、試劑盒及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510833901.3
• 申請日: 2015-11-26
• 公開（公告）號: CN105316330B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳明諒;劉國勝;陳建明;楊慧
• 申請（專利權(quán)）人: 國家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/686;C12Q1/70
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 方惠春

本發(fā)明公開了一種同時檢測對蝦HPV、MBV和IHHNV的多重PCR檢測引物、試劑盒及用途。所述引物分別為HPV?F和HPV?R、MBV?F和MBV?R、IHHNV?F和IHHNV?R，序列如SEQ ID NO:1和2，SEQ ID NO:3和4，SEQ ID NO:5和6所示。本發(fā)明的引物彼此間無交叉，且不與其它病毒產(chǎn)生交叉，假陽性率低，能夠特異性的檢測出分布于世界各地不同地區(qū)的3種病毒的病毒株，具有廣泛適用性，具有非常高的特異性和敏感性，檢測限低。同時對檢測的病毒基因片段無需再進行克隆、測序和序列比對。一次實驗即可檢測出待測樣品中是否含有這三種病毒中的一種、兩種或三種。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及海洋生物病原檢測技術(shù)，具體涉及一種同時檢測對蝦肝胰腺細小病毒(Hepatopancreatic parvovirus,HPV)、斑節(jié)對蝦桿狀病毒(Monodon baculovirus,MBV)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosisvirus,IHHNV)的多重PCR檢測引物、試劑盒及用途。

背景技術(shù)

對蝦肝胰腺細小病毒(Hepatopancreatic parvovirus,HPV)屬于細小病毒科，濃核病毒亞科，平均直徑22-23nm，有包涵體，單鏈DNA病毒(ssDNA)，無包膜二十面體。其在病毒學(xué)中屬于慢性感染類型，傳染性強，發(fā)病率高。對蝦感染肝胰腺細小病毒后,肝胰腺上皮細胞腫大，變性，尤其在疾病充分發(fā)展期的病蝦肝胰腺、鰓組織，以及后胃和前中腸粘膜層細胞壞死解體，最后肝胰腺僅剩下一團結(jié)締組織，以至病蝦失去消化吸收功能，呼吸器官也遭到嚴重損害，造成窒息而死。

對蝦肝胰腺細小病毒是已知的導(dǎo)致對蝦生長緩慢的主要細小病毒之一。HPV已在世界各地的野生對蝦和養(yǎng)殖對蝦中被發(fā)現(xiàn)。其致病率高，分布廣，對對蝦養(yǎng)殖業(yè)可造成巨大的經(jīng)濟損失。HPV很少單獨感染對蝦，多與其他多種病原性的病毒發(fā)生混合感染，并且在大多數(shù)情況下，重感染的對蝦卻沒有明顯的炎癥反應(yīng)。致病蝦生長變緩、活動呆滯、食欲減退、較少蛻皮，蝦體表常有雜物附著；成蝦甲殼變軟，腹部肌肉變白，常并發(fā)二次性細菌感染，以弧菌較為常見。迄今為止，還沒有有效的預(yù)防措施可減少對蝦的感染。

斑節(jié)對蝦桿狀病毒(Monodon baculovirus,MBV)又名草蝦桿狀病毒病(grassshrimp baculovirus)、因首次在斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)中發(fā)現(xiàn)而得名。1987-1988年MBV在臺灣等地區(qū)爆發(fā)流行，1991年在大陸發(fā)現(xiàn)。在中國、泰國、新加坡、印度尼西亞、馬來西亞均有廣泛分布。

斑節(jié)對蝦桿狀病毒屬桿狀病毒科，核型多角體病毒屬A亞群。病毒為桿狀，有囊膜，有包涵體，為雙鏈DNA病毒(dsDNA)。核衣殼大小為42×246nm，連囊膜大小約為75×324nm。不同種類的蝦所觀察到的病毒顆粒大小略有差異。斑節(jié)對蝦桿狀病毒感染部位是肝胰腺及前中腸的上皮細胞核，并在細胞核內(nèi)產(chǎn)生多個嗜酸性的圓形或橢圓形的病毒包涵體。

致病蝦食欲減少，活動呆滯，鰓、附肢和體表常帶有大量的附生生物。受感染后幼體除部分體色加深外，并無特別癥狀，多數(shù)攜帶病毒的蝦活動正常。受感染幼體群常常無明顯的癥狀表現(xiàn)而出現(xiàn)大量死亡，更因繼發(fā)感染其它病毒、細菌或附生物而導(dǎo)致幼體大量死亡。

傳染性皮下及造血組織壞死病毒(Infectious hypodermal and hematopoieticnecrosis virus,簡稱IHHNV)最初于1981年在美國夏威夷地區(qū)養(yǎng)殖細角濱對蝦(Litopenaeus stylirostris)中被發(fā)現(xiàn)(Lightner et al，1983)。