[發(fā)明專利]展現(xiàn)劑量響應(yīng)的性別分選的精子以及生產(chǎn)展現(xiàn)劑量響應(yīng)的性別分選的精子的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510827567.0
• 申請(qǐng)日: 2015-09-25
• 公開（公告）號(hào): CN105462918B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·維什瓦納特;K·M·埃文斯;T·B·吉利根;J·莫雷諾;R·楞次;C·岡薩雷斯-馬琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 英格朗公司
• 主分類號(hào): C12N5/076
• 分類號(hào): C12N5/076
• 代理公司: 北京三友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;李棟修

1.一種生產(chǎn)具有改善的劑量響應(yīng)的性別分選的精子的方法，所述方法包括：

a)用緩沖保持介質(zhì)稀釋牛精子樣品，精子樣品與緩沖保持介質(zhì)之比為1：1至1：10；

b)通過(guò)將經(jīng)稀釋的精子樣品離心，除去上清液和重懸浮直到達(dá)到目標(biāo)濃度而調(diào)節(jié)經(jīng)稀釋的精子樣品的濃度至目標(biāo)濃度范圍，其中所述目標(biāo)濃度模擬天然存在的精子濃度；

c)用DNA選擇性染料染色所述精子樣品；

d)用流式細(xì)胞儀將經(jīng)染色的精子樣品性別分選到捕獲液中；

e)將步驟a)～c)的精子樣品的pH值維持在目標(biāo)pH值范圍；以及

f)向所述緩沖保持介質(zhì)、所述DNA選擇性染料和所述捕獲液的至少一種中補(bǔ)充至少一種抗氧化劑，其中通過(guò)步驟a)～f)分選的至少300萬(wàn)性別分選的精子的劑量在300萬(wàn)細(xì)胞至400萬(wàn)細(xì)胞的劑量下展現(xiàn)改善的劑量響應(yīng)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中用緩沖保持介質(zhì)稀釋精子樣品和調(diào)節(jié)經(jīng)稀釋的精子樣品的濃度至目標(biāo)濃度范圍的步驟進(jìn)一步包括：a)在7.0～7.4的目標(biāo)pH下在所述緩沖保持介質(zhì)中稀釋精子樣品；和b)將經(jīng)稀釋的精子樣品濃縮至800×10⁶個(gè)精子/ml～2100×10⁶個(gè)精子/ml的目標(biāo)濃度。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中通過(guò)步驟a)～e)分選的至少400萬(wàn)性別分選的精子的劑量具有與1500萬(wàn)常規(guī)未經(jīng)分性精子至少相同的受精力。

4.一種通過(guò)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的性別分選的授精配劑，所述授精配劑在大于300萬(wàn)的劑量下具有劑量響應(yīng)。