[發明專利]一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子及應用

有效

• 申請號: 201510822766.2
• 申請日: 2015-11-23
• 公開（公告）號: CN106754756B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 賈凡;徐富強;胡新天;吳詩昊;朱續濤
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢物理與數學研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/04;A61K49/00;C12R1/93
• 代理公司: 42001 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 龔瑩瑩;王敏鋒

本發明公開了一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子及應用，所述西門利克森林病毒復制子為含有熒光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV?replicon。利用該復制子可制備出攜帶綠色熒光蛋白基因且具有單次感染性的SFV病毒，該復制子或其制備的病毒顆粒在非人靈長類，特別是猴神經細胞的標記、細胞精細形態的描繪、神經環路標記、藥物篩選平臺的建立、藥物抑制病毒作用機制、病毒疫苗和診斷試劑的研發、動物模型的建立、病毒復制和致病機制的分析等方面具有廣泛的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體涉及一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子及應用。

背景技術

人腦是自然界中最為復雜的系統之一,而神經網絡是大腦行使功能的基礎，神經網絡的正常連接，使得機體產生正常的生理活動，如認知、學習、記憶和恐懼等；神經網絡的異常往往導致神經疾病的出現，尚無有效手段來治療這些神經疾病。目前，正常生理活動和致病機制均不清楚，主要的原因在于腦神經網絡連接信息的缺乏。因此，開展腦神經環路的研究而繪制高精度的腦功能連接圖譜，對于了解人的生理活動和致病機制具有重要的意義。

西門利克森林病毒(Semliki forest virus，SFV)屬于披膜病毒科甲病毒屬，其基因組為單股正鏈RNA，長度約為12kb。基因組編碼的多聚蛋白可切割成4個結構蛋白(C、P62、6K和E1)和4個非結構蛋白(nsP1、nsP2、nsP3和nsP4)。塞姆利基森林病毒具有廣泛的宿主范圍，包括：人、鼠、猴等，能夠感染神經系統，一方面不利于人類的健康和農業生產，另一方面，這種感染特性可以使得其成為介導外源基因到宿主體內的載體，另外，西門利克森林病毒感染腦神經系統的特性使其成為具備解析神經環路的能力。但是因為存在一系列工藝和技術改造方面的問題，所以目前其還沒有應用到細胞精細形態的描繪、靈長類神經環路的標記等方面。而本發明通過一系列的條件優化、系統的改造和升級，獲得了一種高效且穩定的具有單次感染特性的表達綠色熒光蛋白的SFV系統，明確了其在非人靈長類神經環路應用方面的效果，為開展腦科學研究提供了良好的工具系統。

隨著分子生物學的不斷發展，科學家已經能夠通過反向遺傳學的手段來定向改造病毒，為深入開展相關的病毒學研究提供了良好的工具。因此，本發明分別采用不同的技術途徑獲得了一種高效且穩定的具有單次感染特性的表達綠色熒光蛋白的SFV系統。將在神經細胞和非神經細胞精細形態的描繪、靈長類和非靈長類解析腦神經環路、病毒抗原表位分析和藥物(如抗體藥物)篩選、疫苗和診斷試劑的研發、動物模型的建立和病毒復制與致病機制的分析等方面具有廣泛的應用價值和前景。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子，該復制子為含有熒光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV-replicon。該復制子可用于西門利克森林病毒類病毒顆粒的制備。

本發明還有一個目的在于提供了一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子的應用，包括該復制子可用于制備西門利克森林病毒類病毒顆粒。制備出的病毒樣顆粒可用于非人靈長類神經細胞快速標記，同時，該復制子還可用于蛋白表達、基因治療、神經細胞精細形態的描繪、神經環路的解析、神經環路稀疏標記、病毒抗原表位分析和藥物(如抗體藥物)篩選、疫苗和診斷試劑的研發、動物模型的建立和病毒復制與致病機制的分析等方面具有廣泛的應用價值。

為了實現以上目的，本發明采用如下技術方案：

一種用于非人靈長類神經細胞快速標記的西門利克森林病毒復制子，該復制子為含有熒光蛋白基因和SEQ ID NO.4所示序列的pSFV-replicon。